Irisin通过自噬对PA诱导的INS-1细胞功能和凋亡的影响.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表 V 前 言 1 1 材料与方法 2 1.1 材料 2 1.2 实验方法 4 1.3 统计学分析 13 2 结 果 14 2.1 不同浓度Irisin 对PA 干预后的INS-1 细胞自噬相关蛋白水平的影响 14 2.2 Irisin 对PA 诱导的INS-1 细胞胰岛素分泌的影响 15 2.3 Irisin 对PA 诱导的INS-1 细胞自噬相关蛋白水平的影响 16 2.4 Irisin 对PA 干预后的INS-1 细胞自噬流水平的影响 18 2.5 Irisin 对PA 干预后的INS-1 细胞凋亡水平的影响 19 3 讨 论 20 4 结 论 23 参考文献 24 综 述 28 致 谢 37 个人简历 38 山西医科大学硕士学位论文 Irisin 通过自噬对PA 诱导的INS-1 细胞功能和凋亡的影响 摘 要 目的： 1、探讨Irisin 对PA 诱导的INS-1 细胞自噬水平的影响； 2 、探讨Irisin 是否通过影响PA 诱导的INS-1 细胞的自噬水平，从而影响INS-1 细胞 的分泌功能和凋亡水平。 方法： 培养INS-1 细胞，将细胞分组为正常组、PA 组、PA+100 ng/ml Irisin 组（PA+I1 组）、PA+500 ng/ml Irisin 组（PA+I2 组）、PA+1000 ng/ml Irisin 组（PA+I3 组）、PA+1500 ng/ml Irisin 组（PA+I4 组）六组，通过用不同浓度的Irisin 干预INS-1 细胞，用Western blot 观察自噬相关蛋白p-mTOR/mTOR 、p62、LC3 II/I 的水平，证明Irisin 可以影响 PA 干预的INS-1 细胞的自噬水平，并筛选出最佳的Irisin 干预浓度。 为了观察Irisin 是否可通过自噬从而影响PA 干预的INS-1 细胞的胰岛素分泌功 能和凋亡水平，将INS-1细胞分为正常组、PA 组、PA+1500ng/ml Irisin 组、PA+ 1500ng/ml Irisin+rapamycin 组、PA+1500ng/ml Irisin+3-MA 组。用3.3 mmol/L 和16.7 mmol/L 的 葡萄糖浓度刺激检测干预后胰岛素的分泌水平，Western blot 检测p-mTOR 、mTOR 、 p62 、LC3II 、LC3I 的蛋白水平，用mRFP-GFP-LC3 腺病毒转染观察自噬流水平，流 式细胞仪检测细胞凋亡水平。 结果： ①与正常组相比，PA 组LC3II/I 的比值增高[(0.745±0.035) vs. (1.015 ±0.012)， P=0.000] ，随着Irisin 干预浓度的增加，LC3II/I 的水平较PA 组也逐渐升高且有统计 学意义（PA+I1 组 1.465±0.028 ，PA+I2 组2.269 ±0.063 ，PA+I3 组 1.858±0.074 ， I 山西医科大学硕士学位论文 PA+I4 组2.355 ±0.074 ，P=0.000 ，P=0.000 ，P=0.000 ，P=0.000 ），Irisin 浓度为1500 ng/mL 时LC3II/I 的水平最高。 ②与正常组比较，PA 组 INS-1 细胞上清液中胰岛素水平在 3.3 mmol/L 和 16.7 mmol/L 葡萄糖刺激下均下降[(0.447±0.067) ng/ml vs. (0.138±0.012) ng/ml ，P=0.000 ； (0.625 ±0.041) ng/ml vs. (0.245 ±0.043) ng/ml ，P=0.000] ，Irisin 干预后胰岛素水平较 PA 组均升高[3.3 mmol/L: (0.138 ±0.012) ng/ml vs. (0.322 ±0.041) n