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蛋白质稳定性.ppt

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第四章蛋白质的稳定性和稳定化 第一节蛋白质的稳定性 蛋白质的稳定性指的是蛋白质抵抗各种因素的影 响,保持其生物活力的能力 蛋白质稳定性的分子原因 1、金属离子、底物、辅因子和其它低分子量配体的结 合作用。 金属离子由于结合到多肽链的不稳定部分(特别是弯曲处) 因而可以显著增加蛋白质的稳定性。当酶与底物、辅因子和其 它低分子量配体相互作用时,也会看到蛋白质稳定性的增加 2、蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂的作用 在体内,蛋白质常与脂类或多糖相互作用,形成复合物, 从而显著增加蛋白质稳定性。 当蛋白质形成复合物肘,脂分子或蛋白质分子稳 定到跷水簇上,因而防止疏水簇与嵱剂的接触 屏蔽了蛋白质表面的疏水区域,从而昰著增加蛋 白质稳定性 3、盐桥和氩键 蛋白质中盐桥的数目较少,但对蛋白质稳定性贡 献很显著。嗜热脱氫酶亚基间区域有盐桥协作糸 统,这是嗜温脱氫酶没有的。因此嗜热酶的催化 活力的变性温度和最适温度都比嗜温酶高出约 20C。 用定点突变法定性定量地测定了引入的键对蛋 白质的稳定性的贡献,发现加入的氫键与蛋白质 稳定性无关。 4、二硫键 大分子的分子内交联可增强其坚实性,并提高 其在溶液中的稳定性 稳定化指的是熵性质:由于交联即蛋白质中形 成二硫键,伸展蛋白质的熵急剧降低 物质的熵是它所处状态的分子混乱度 (也称无序度)的度量。熵值小的状态对 应比较有序的状态,熵值大的状态对应比 较无序的状态 种物质从固态到液态到气态,分子热 动的混乱程度依次增强,而熵值也依次增 大 5、对氧化修饰敏感的氨基酸含量较低 结构上重要的氨基酸残基(如活性部位氨基酸) 的氧化作用是蛋白质失活的最常见的机理之 半胱氨酸的巯基和色氨酸的吲哚环,对氧化特别 敏感,因此,这些不稳定氨基酸的数目,在高度 稳定的嗜热蛋白质中比在相应的嗜温蛋白质中显 著偏低。 6、氨基酸残基的坚实装配 蛋白质结构中存在有空隙。按照 Chothia说法,蛋白球 体积的大约25%仍未充满,即不是被氨基酸占据。但溶质 分子可以包埋在这些孔隙中。这些孔隙通常为水分子所充 满。分子量为2-3万的蛋白质中约有个5-15水分子。由 布朗运动调节的极性水分子与球体疏水核的接触会导致蛋 白质不稳定。随着水分子从孔隙中除去,蛋白质结构变得 更坚实,蛋白质的稳定性也增加。因此,蛋白质的坚实化 可作为一种人为稳定蛋白质的方法。 7、疏水相互作用 带有非极性侧链的氨基酸大约占蛋白质分子总体积 的一半。它们与水的接触从热力学上来说是不利的 因为非极性部分加入水中,会使水的结构更有序 地排列。 水分子的这种结构重排,显然能引起系统的熵降低 和蛋白质折叠状态的改变:蛋白质的非极性部分总 是倾向于使其不与水接触,并尽可能地隐藏在蛋白 球体内部。从而蛋白质稳定性增加。 第二节蛋白质不可逆失活的原图和机理 失活机理 变性条件 聚合(有时伴随形成分子间二硫键) 加热,变性剂脲,盐酸胍,SDS, 级结构改变 1、酸、碱催化的肽键水解,蛋白水解作用和极端值,加热,蛋自水解酶 2、能基氧化(半胱氨酸巯基和色氨酸吲哚氧气(特别在加热时)氧气代谢产物,辐射 3、二硫键还原,分子间二硫交换 加热,高pH,巯基化合物,二硫化物 4、必需巯基的化学修饰 金属离子,二硫化物 5、蛋白质磷酸化 蛋白激酶 6、在催化过程中由于反应中间物(主要是自底物 由基)引起的“自杀”失活 7、氨基酸的外消旋化 加热,极端p 键剪切后形成新氨基酸(赖氨丙氨加热,高p 9、天冬酰胺脱氨 加热,高PH 辅酶分子从活性部位上解离 合剂、透析、加热,金属离子 寡聚蛋白解离成亚基 化学修饰,极端pH,脲,表面活性剂,高温或低 吸附到容器表面 蛋白质浓度低,加热 “不可逆”构象改变 加热,极端pH,有机溶剂,盐酸 流体中的剪切失活 流体形变 蛋白水解酶和自溶作用 蛋白水解酶可催化肽键水解。当蛋白质底物也是一种蛋 白水解酶时,就会发生自我降解现象,叫作自溶。 二、聚合 聚合分三步进行:N+U→A→As 其中NU代表可逆伸展,A是聚合的蛋白质,As是发生了二硫 交换反应的蛋白质聚合物

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