《微生物学》教学课件：07 微生物的遗传变异和育种.pptVIP

第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 2. 转导 ——局限性转导 局限性转导与普遍性转导的主要区别： a）被转导的基因共价地与噬菌体DNA连接，与噬菌体DNA一起 进行复制、包装以及被导入受体细胞中。而普遍性转导包装的可能全部是宿主菌的基因。 b）局限性转导颗粒携带特定的染色体片段并将固定的个别基因导入受体，故称为局限性转导。 而普遍性转导携带的宿主基因具有随机性。 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——概念 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组过程。 1946年， Edward L.Taturm 和Joshua Lederberg 细菌的多重营养缺陷型杂交实验 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——实验证据 中间平板上长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致！ 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——实验证据 证实接合过程需要细胞间的直接接触的“U”型管实验( Bernard Davis，1950 ) 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——接合机制 以大肠杆菌为例 接合作用由F因子介导 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛（sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因。 含有F因子的细胞：“雄性”菌株(F+)，其细胞表面有性菌毛 不含F因子的细胞：“雌性”菌株(F-)，细胞表面没有性菌毛 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——接合机制 F因子为附加体质粒，既可脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上 (依据F因子在细胞内的存在形式) 大肠杆菌的四种细胞形式 a）F-菌株， 不含F因子，没有性菌毛，但可以通过 接合作用接收F因子而变成雄性菌株（F+）； b）F+菌株， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F’菌株，Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F ’因子。 细胞表面同样有性菌毛。 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——接合机制 第四节 基因重组和杂交育种 一、原核微生物的基因重组 3. 接合 ——接合机制 1） F+×F-杂交 F+菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞 的染色体DNA一般不被转移。 杂交的结果：给体细胞和受体细胞均成为F+细胞 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 （2）抗药性突变株的筛选 基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性。 特点： 正选择标记 （突变株可直接从抗性平板上获得-----在加有相应抗生素的平板上，只有抗性突变能生长。所以很容易分离得到。） 梯度平板法（gradient plate）是定向筛选抗药性突变株的一种有效方法，通过制备琼脂表面存在药物浓度梯度的平板、在其上涂布诱变处理后的细胞悬液、经培养后再从其上选取抗药性菌落等步骤，就可定向筛选到相应抗药性突变株。 第三节 基因突变与诱变育种 指从自然界分离到的任何微生物在其发生认为营养缺陷突变前的原始菌株。 营养缺陷型（Auxotroph） 野生型菌株经诱变剂处理后，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的一类突变菌株。 野生型（Wild type, Wild strain） 原养型（Wild type, Wild strain） 一般指营养缺陷型突变株经回复突变或重组后产生的、营养要求在表型上与野生型相同的菌株。 [A+B-或A-B+或A-B-] [A+B+] [A+B+] 七、营养缺陷型菌株的筛选 凡能满足一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半组合培养基。 基本培养基（Minimum medium, MM） 仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需要的最低成分的组合培养基。 完全培养基（Complete medium, CM） 补充培养基（Supplemental medium, SM） 凡能满足相应的营养缺陷型突变株生长需要的组合或半组合培养基。 [-] [+] [A]或[B] 第三节 基因突变与诱变育种 七、营养缺陷型菌株的筛选 1. 营养缺陷型的筛选程序 营养缺陷型的诱发 淘汰野生型菌株 营养缺陷型的检出 营养缺陷型的鉴定 第三节 基因突变与诱变育种 七、营养缺陷型菌株的筛选 2. 营养缺陷型的诱发 第三节 基因突变与诱变育种 七、营养缺陷型菌株的筛选 3. 淘汰野生型菌株 方法 抗生素法