发酵生产中噬菌菌体污染与防治.pptVIP

发酵生产中噬菌体的 污染与防治 一、噬菌体是什么 噬菌体污染的特征 、噬菌体的检査方法 四、怎样控制噬菌体对发酵的危害 四川盈嘉合生科技有限公司  、噬菌体是什么 噬菌体是病毒的一种,是一种极微小的生物,体 积是细菌的1/1000左右,它可以通过细菌过滤器 只有在电子显微镜下才能看到 20199/18  噬菌体的主要特性 (1)专一的寄生性。噬菌体只能在专一的宿主细胞中生长繁殖,只能 在活的、处于繁殖阶段的细胞中生长繁殖,不能脱离宿生而自行生 长繁殖。如果不同菌株的亲缘关系比较近,那么此菌株也是会感染 的,特别是针对长期生产同一产品的发酵工厂要特别注意,在换新 菌株之前必须了解其背景。 (2)不耐热性。游离的噬菌体在45℃条件下10min就可使其失活 (3)不耐药性。直接在噬菌体上喷洒1%新洁尔灭、75%酒精、1%双 氧水、5%的甲醛等都可使其失活 20199/18  、噬菌体污染的特征  般感染噬菌体后且爆发的现象有 (1).发酵液光密度开始下降 (2).pH逐渐上升 (3).耗营养缓慢或停止 (4).OD回升 (5).泡沫大、料液略黏 (6).镜检时发现菌体减少,发胖,革兰氏染色后呈现红色碎片。严重时 可出现拉丝或网状,或呈鱼刺状,几乎看不到完整菌体 (7)…用含有噬菌体的发酵液点在平板上能看到噬菌斑 20199/18  噬菌体的检查方法 20199/18  噬菌体的检查方法 1.双层琼脂平板法 ①双层琼脂平板的制备:先用7~8mL1.5~2%的琼脂培养基作底层 凝固后,加入3~4mL冷至45℃的0.8~1%琼脂上层培养基(其中含 0.2mL发酵菌种悬液和0.1mL(视噬菌体情况进行稀释)待检发酵液), 让其平整凝固 ②在发酵菌的适宜温度下培养,细菌一般培养16~20小时。 ③检查有无透明的噬菌斑。 2.液体培养检査查法 将培养基、发酵菌种及待检发酵液三者混合,培养后观察培养液是否 变清。  3.斑点试验法 先制备好涂布有发酵菌种的平板,再用接种环或无菌吸管取少许 发酵液在平板上点种,培养后,观察是否有噬菌斑。 4.玻片快速法 将发酵菌种、发酵液和少量琼脂培养基(含0.5~0.8%的琼脂)混 匀后涂布于无菌载玻片上,经短期培养后,在低倍镜下观察是否有 噬菌斑。  5.平板交叉划线法 取平皿按常规倒入培养基,制成平板,然后取指示菌液划线, 再取待检发酵液与其交叉划线。37.5℃恒温培养10~12h左右。这 种交叉划线检查法,当噬菌体较少时能发现噬菌斑,如果噬菌体 较多,则发现交叉处透明,同时可见到由含噬菌体胶液线向敏感 菌线析展的一条亮线(噬菌带)。此法既可检査噬菌体,又可检 查杂菌污染。 20199/18  6空气中噬菌体的检测 双层平板法 先用7~8mL15~2%的琼脂培养基作底层,凝固后,加入 3~4mL冷至45℃的0.5~08%琼脂上层培养基(其中含0.2mL发 酵菌种悬液),让其平整凝固:放在待检区域开盖放30min, 在发酵菌的适宜温度下培养过夜。看有无噬菌斑 这一方法适合空气中噬菌体浓度较高的情况。如空气中噬菌 体浓度一般,建议可先用空气抽滤器,之后将吸附于膜上的物 质用适量的缓冲液洗脱,再双层平板法检测洗脱液中噬菌体即 可 20199/18