【临床血液学-实验课课件】_实验六 血红蛋白电泳.pptVIP

血红蛋白液制备血红蛋白电泳 血红蛋白电泳Hemoglobin Electrophoresis 原理 操作 血红蛋白液的制备√ 浸膜√ pH8.5TEB缓冲液中浸透，用滤纸吸干 点样：用加样器在膜的粗糙面加Hb液（10uL)，点样距边缘1.5cm,注意 区分毛面，光面（示教） 电泳：点样线在负极一侧，毛面向下，平衡10min后接电源调节电压至220V电泳20min 染色：用丽春红S染色1分钟，用酸洗液1分钟，共漂洗3次，漂洗至底板显白色后自然干燥 结果观察 注意事项 醋纤膜在加样前应把水分吸干，否则影响区带分离的清晰度。 电泳时间不宜太长，应灵活掌握。以HbA和HbA2两区带分离清晰为电泳终止的时间。 电流不能过大，否则会导致区带过于集中，达不到分离效果。 正常对照和已知异常Hb对照（质控）。 临床意义 与正常比较，发现异常血红蛋白区带。如HbH, HbE, Hb Barts, HbS, HbD, HbC等。 HbA2增多见于β-地贫，轻度增加亦可见于肝病、肿瘤和某些血液病。HbE病也在HbA2区带位置增加，但含量很大（10%）。 制备血红蛋白液： 109mmol/L枸橼酸盐抗凝血1ml置于5ml离心管内 3000r/min离心10分钟，弃血浆和白细胞层。 以8倍RBC体积的生理盐水洗涤RBC3次，每次 3000r/min离心10分钟，最后一次3000r/min离心15分 钟，弃上清。 压积RBC中沿管壁加入两倍蒸馏水，弃上清，重复2次 压积RBC中沿管壁加入等量蒸馏水，置于振荡器上震荡 5分钟，使完全溶血，随后加入RBC压积1/2量四氯化 碳，置于振荡器上震荡5分钟。 3000r/min离心15分钟分离上层血红蛋白液。 ， pH8.6 血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH值时，血红蛋白带负电，在电场中，从负极向正极泳动 由于不同血红蛋白所带电荷不同，分子量不同，其泳动的速度不同，可以分离出各自的区带 H J K A G D E A F A2 CA 异常 正常 － + 慢速带 快速带 HbA2 HbA1 快速带 *