临床微生物检验_实验六.pptVIP

将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。 如果出现低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。 影 响 因 素 培养基的质量 药敏纸片的质量 菌液的浓度、纯度、接种菌量 孵育的温度和观察时间 操作质量，等 分枝杆菌与抗酸染色 卡介苗、抗酸染色液、玻片，等 1.掌握抗酸染色的原理、方法和结果判断。 2.掌握结核分枝杆菌的形态。 目的要求 试剂和器材 细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸 ，一般不易着色，如果经加温或延长染色时间而着色，一旦着色，能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，所以又称抗酸杆菌。 抗酸染色原理 涂片、干燥、紫外杀菌、固定 1.初染： 石炭酸复红溶液 加热至冒白烟 5min 2.媒染： 3%盐酸酒精溶液 3min 3.复染：碱性美蓝溶液 1min 结果观察 结核分枝杆菌的形态 抗酸染色阳性 蓝色背景下菌体红色。 菌体细长略弯曲 有时可见分枝，呈单、成堆或成束排列。 结核杆菌（抗酸染色） 结核杆菌（抗酸染色） 结核杆菌（抗酸染色） 结核杆菌（抗酸染色） 培养基（L-J培养基=罗氏培养基） 培养条件（专性需氧、较长时间） 菌落特征 固体培养基---典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状、乳酪色或淡黄色，形似菜花样。 结核分枝杆菌的分离培养 菜花样菌落 结核杆菌（L-J培养基） 课后小结 药敏结果的判断及CLSI标准 抗酸染色的注意事项：加热 报告方式： 萋尼氏染色镜检结果分级报告标准 抗酸杆菌阴性 (－)：连续观察300个油镜视野未 发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数：1～9条/300视野。 抗酸杆菌阳性（1＋）：1～9条/100视野。 抗酸杆菌阳性（2＋）：1～9条抗酸杆菌/10视野 抗酸杆菌阳性（3＋）：1～9条抗酸杆菌/每视野。 抗酸杆菌阳性（4＋）：≥10条抗酸杆菌/每视野 1.K-B法药敏试验结果分析 琼脂稀释法药敏试验（1份/组） 1. 配制不同浓度抗菌药物 2. 配制含不同浓度抗菌药物的MH平板（共11个平板） 3. 点种金葡菌及铜绿于以上MH平板中 第二天实验内容 用刻度尺量取抑菌环直径，抑菌环 的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 根据CLSI标准: 敏感(susceptible,S) 耐药(resistant,R) 中介(intermediate,I) 药敏结果判断 抑菌圈直径的测量 抗菌药物 纸片含药量 抑菌环直径(mm) R I S 青霉素 10U ≤28 - ≥29 苯唑西林 1ug ≤10 11-12 ≥13 万古霉素 30ug - - ≥15 庆大霉素 10ug ≤12 13-14 ≥15 环丙沙星 5ug ≤15 16-20 ≥21 克林霉素 2ug ≤14 15-20 ≥21 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性评价 抗菌药物 纸片含药量 抑菌环直径(mm) R I S 哌拉西林 100ug ≤17 - ≥18 头孢他啶 30ug ≤14 15-17 ≥18 亚胺培南 10ug ≤13 14-15 ≥16 庆大霉素 10ug ≤12 13-14 ≥15 环丙沙星 5ug ≤15 16-20 ≥21 阿米卡星 30ug ≤14 15-16 ≥17 铜绿假单胞菌抗菌药物敏感性评价 葡萄球菌药敏结果解释 原理：将药物混匀与琼脂培养基中，配制含不同浓度的药物平板，使用多点接种器接种细菌，孵育后观察细菌生长情况，抑制细菌生长的琼脂平板所含的最低药物浓度为MIC(minimal inhibitory concentration, MIC) 一、目的要求 （1）熟悉琼脂稀释法测定抗生素敏感性的原理、操作方法、结果判读和临床意义。 （2）了解稀释法质量控制 二、主要器材试剂 1. 菌种：金黄色葡萄球菌或铜绿假单胞菌 2. 培养基：MH琼脂 3.器材试剂：无菌NS、无菌蒸馏水、0.5麦氏比浊管、加样器 琼脂稀释法药敏试验 原理：将不同浓度的抗菌药物分别混匀于琼脂培养基中，配制成含不同递减浓度药物的平板并接种待检菌，孵育后观察细菌在含不同浓度药物的平板上的生长情况，以无细菌生长平板的最低药物浓度为待检菌的MIC。 琼脂稀释法药敏试验 含药琼脂的制备： （1）稀释抗菌药物：（倍比稀释法） 配制浓度分别为1.25、2.5、5、10、20、40、80、160、320、640、1280ug/ml的共11种不同浓度的药液。 （2）分别取上述药液2ml加入内径为9cm的标记平板内。 （3）再取融化后已冷至50℃左右的M