（推荐医学）CD34绝对计数.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * CD34+细胞计数 * 双参数荧光散点图的设置 双平台双色CD34+细胞计数设置： CD45/SSC、CD34/SSC、 CD45/SSC、 FSC/SSC、CD45/CD34、FSC/SSC 6个散点图。 * 双参数荧光散点图的设置 单平台三色CD34+细胞计数设置：CD45/SSC、CD34/SSC、 CD45/SSC、FSC/SSC，CD45/CD34、FSC/SSC、7-AAD/SSC、7-AAD/SSC 8个散点图。 * 设门方法 * 双平台ISHAGE设门 白细胞计数需要与CD34+细胞计数使用同一标本检测，并在6h内完成。当白细胞计数不能准确获得时，不能用双平台方法，只能用单平台方法。 * 基本的ISHAGE：双平台法 ▲试剂：CD45-FITC,CD34-PE ▲全血，直接荧光标记，溶血、洗涤、双平台 ▲设门CD45/SSC,CD34/SSC, FSC/SSC，CD45/CD34 河南省人民医院血研所 * * * 标记 定义 G1 R1 G2 R1 and R2 G3 R1 and R2 and R3 CD34+细胞 R1 and R2 and R3 and R4 淋巴细胞 R5 双平台ISHAGE设门 * (1)CD45/SS R1包括所有CD45+及dimCD45。R5为淋巴细胞 (2)CD34/SS。显示R1门内细胞。R2包括所有CD34+细胞，从低SS到中等SS强度。 双平台ISHAGE设门 * (3)CD45/SS。显示R1+R2门内细胞。R3确认CD34+细胞位于低CD45与低SS区域，为真正CD34+细胞。 双平台ISHAGE设门 * (4)FS/SS，取R1+R2+R3门内细胞。R4选取SS大于淋巴细胞下限的细胞，用于去除细胞碎片、聚集血小板的影响。 双平台ISHAGE设门 * (5)CD45/CD34。显示R1门内细胞，设定CD45和CD34阳性十字界线，确定R1的左边界CD45下限。 (6)FS/SS。显示R5门内细胞，用于确定R4的FS下限。 双平台ISHAGE设门 * 单平台ISHAGE设门法 商业化的CD34+细胞绝对计数试剂盒,其CD34+细胞绝对数由专门软件直接计算生成，操作依据是试剂操作说明书。实验室自己配制的抗体组合需要加入商业化荧光微球。 * * 同双平台相比，单平台多设了R6（荧光微球）、R7（细胞碎片）及R8（活的CD34+细胞）。 单平台ISHAGE设门 * 单平台ISHAGE设门法 需手动设门，对操作者要求高；无需同型对照，亦不受抗体浓度及荧光素与蛋白比率的限制，经济廉价，抗体的选择范围也宽；7-AAD活细胞染料，可计数活细胞，需逻辑手动设门。 * 结果报告和审核 * 报告内容 双平台ISHAGE法报告CD34+ 细胞百分比及绝对值； 单平台ISHAGE法报告CD45+ 细胞绝对值、CD34+细胞百分比 及绝对值、活CD45+细胞和 CD34+细胞绝对数。 * 审核内容 包括数据采集阈值的设置、采集细胞数和微粒数、散射光模式、抗体组合