2021年人教版高中生物选修一专题五DNA和蛋白质技术知识点归纳.docVIP

专题五 ＤＮＡ和蛋白质技术 课题一　ＤＮＡ粗提取和判定 一、提取DNA溶解性原理包含哪些方面？ 1.DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样；DNA不溶于酒精。 ①DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？ 在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。 ②在溶解细胞中DNA时，大家通常选择2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出方法是向溶有DNANaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。酒精是一个常见有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（尤其是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。 2.从理论上分析，预冷乙醇溶液含有以下优点。 一是抑制核酸水解酶活性，预防DNA降解； 二是降低分子运动，易于形成沉淀析出； 三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，降低断裂。 3.采取DNA不溶于酒精原理，能够达成什么目标？ 将DNA和蛋白质深入分离。 4.提取DNA还能够利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选择怎样酶和怎样温度值？ 蛋白酶，因为酶含有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。 补充：DNA变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。 5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？ 洗涤剂将细胞膜上蛋白质，从而瓦解细胞膜。 6.当判定提取出物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行判定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺展现蓝色。 原理总结：经过利用不一样浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，能够从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精深入将DNA和蛋白质分离开来，达成提纯目标；最终利用二苯胺试剂判定提取物质是否是DNA。 二、试验材料选择 不一样生物组织中DNA含量不一样。在选择材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取标准。 本试验用鸡血细胞做试验材料有两个原因。 一是因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得； 二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作试验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。 鸡血细胞破碎以后释放出DNA，轻易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了降低DNA损失，最好使用塑料烧杯和试管盛放鸡血细胞液。 三、破碎细胞，获取含DNA滤液 1、若选择鸡血和洋葱作试验材料，则怎样获取含DNA滤液？ 在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后搜集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后搜集滤液。 2.为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一个低渗液体，水分能够大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌机械作用，就加速了鸡血细胞破裂(细胞膜和核膜破裂)，从而释放出DNA。 3．在以上试验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐作用分别是什么？过滤时应该选择（滤纸、尼龙布）。血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选择尼龙布进行过滤。 4.在处理植物组织时需要进行研磨，其目标是什么？研磨不充足产生什么结果？ 破碎细胞壁，使核物质轻易溶解在NaCl溶液中；研磨不充足会使DNA提取量降低，影响试验结果，造成看不到丝状沉淀物、用二苯胺判定不显示蓝色等。 具体做法。10mL鸡血＋20mL蒸馏水→同方向搅拌→3层尼龙布过滤→滤液 三、去除滤液中杂质 1.为何反复地溶解和析出DNA，能够去除杂质？ 用高盐浓度溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中杂质。所以，经过反复溶解和析出DNA，就能够除去和DNA溶解度不一样多个杂质。 最初取得DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要深入提纯DNA。 方案一原理是DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样；方案二原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三原理是蛋白质和DNA变性温度不一样。 方案二和方案三原理有什么不一样？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取DNA和蛋白质分开；方案三利用是DNA和蛋白质对高温耐受性不一样，从而使蛋白质变性，和DNA分离。 四、析出和判定 1.在滤液中仍然含有部分杂质，怎样除去这些杂质呢？得到DNA呈何颜色？ 滤液和等体积冷却酒精混合均匀，静置2～3分钟，析出白色丝状物就是DNA。DNA呈白色。 2.怎样判定析出白色丝状物就是DNA呢？ 具体做法。试管2支，编号甲乙→各加等量5mLNaCl溶液→甲中放入少许白色丝状物，使之溶解→各加4mL二苯胺，混合均匀→沸水浴5min→观察颜色改变 五、试验操作