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氯化两面针碱的体外肾毒性研究 【摘要】 目的观察氯化两面针碱在体 外对人胚肾细胞293的毒性作用。方法采用 MTTfe检测不同浓度氯化两面针碱对人胚肾 细胞293的毒性。结果氯化两面针碱在体外 对人胚肾细胞293有一定的毒性作用。结论 氯化两面针碱可抑制人胚肾细胞 293的增殖， 对肾脏有一定的毒性。 【关键词】 氯化两面针碱；人胚肾细胞 293;体外肾毒性 Abstract : ObjectiveTo detect the toxicity of nitidine chloride in human kidney cell 293 in proliferation was assayed by MTT chloride inhibited the proliferation of human cell 293 in a dose-dependent chloride has the function of inhibiting proliferation on the kidney cell 293. Key words: Nitidine chloride; Human kidney cell 293; Kidney toxicity; In vitro 中药抗肿瘤是目前界研究的一个，很多 中药成分被证实具有较好的抗肿瘤效果而 得以逐步走向。氯化两面针碱是两面针制剂 的主要有效成分，在抗炎、镇痛、抗肿瘤、 心血管系统等方面的作用已有较多报道。 氯 化两面针碱有较强的抗癌作用，据文献报 道，氯化两面针碱对 LEWIS肺癌、鼻咽癌、 肝癌、慢性粒细胞白血病均有抑制作用，对 小鼠艾氏水癌、肝癌腹水也有效，而其对肾 的毒性问题未见报道，特别是在细胞水平、 分子水平都未见报道。作为一个新型的抗肿 瘤药物，其肾毒性大小至关重要。 本实验中， 我们考察了氯化两面针碱在体外对人胚肾 细胞293的毒性作用。 1材料与仪器 试药氯化两面针碱标准品（中国药品 生物制品检定所）;四嚓哇蓝（MTT）（Sigma公 司）;二甲基亚砚（DMSO）（Sigma公 司）;DMEM（美国GIBCOBR公司）；胎生牛血清 （杭州四季青生物材料研究所公司 ）;胰蛋白 酶（美国Amresc。公司公司）;谷氨酰胺（美国 Amresco 公司）;PBS（美国 Amresco 公司）;注 射用青霉素钠（华北制药股份有限公司）;注 射用硫酸链霉素（大连美罗大药 厂）;HEPES（Sigma 公司）。 仪器二氧化碳培养箱（美国Forma Scientific 公司）;倒置显微镜（日本 Olympus公司）;酶标仪（芬兰thermo公司）; 超低温冰箱（日本三洋公司）;96孔培养板 （美国BIO-RAD公司）;6孔培养板（美国 BIO-RAD公司）;超净台（苏州净化设备厂）; 台式离心机（上海安亭科学仪器厂）;电热 恒温水浴锅（北京市医疗设备厂）。 细胞株人胚肾细胞293细胞株（南京凯 基生物科技有限公司）。 2方法 DME曙养液的配置DMEF?养干粉以1 000 ml三蒸水充分溶解，加入 NaHCO3 g, HEPES g,加入青霉素、链霉素使其终浓度 为100 U?ml-1 ,在超净工作台中过虑除菌， 分装成90 ml/瓶，-20C保存备用，临用前 加10 ml热灭活（56 C, 30 min）胎牛血清。 梯度氯化两面针碱的制备精密称定氯 化两面针碱标准品适量用 DMS寤解后，用 无血清培养液依次稀释，配置成25 , 5 ,,, M g/ml浓度梯度的氯化两面针碱系列浓度 样品，置于4C冰箱中保存备用。 细胞培养人正常胚肾细胞 293分别培养 于含DME疏全培养液的玻璃培养瓶中，置 于37C，饱和湿度，5%CO2勺培养箱中，定 期观察更换培养液。细胞铺满培养瓶底部时 传代，用PBS冲洗两次，加入％夷蛋白酶2 ml 消化液，置37C约1 min,倒置显微镜下观 察消化细胞，若胞质回缩，细胞间连接消失， 表明此时细胞消化适度，吸取上清液，加入 完全培养液2 ml,反复吹打，将细胞吹打均 匀，调整培养瓶中细胞浓度至 1X 105/ml, 加入完全培养液，置于 CO2的培养箱。实验 中所用细胞均处于对数生长期，活细胞数大 于95% 氯化两面针碱的肾毒性实验（MTT法）取 对数生长期的人正常胚肾细胞 293用胰酶消 化后，用DME瞄养液吹打制成细胞悬液加 入96孔培养板，每孔 190 p l ,在5%CO2 37C培养箱培养24 h待细胞完全贴壁后， 受试孔加入系列浓度受试药物 10 l每药3 孔，阴性对照孔加入含％DMSO无血清培养 基10(1 l ,空白对照孔加入等量的含药无血 清培养基而无细胞，各孔加培养基至200 I, 培养箱孵育24, 48, 72 h,加入5 mg/m