免疫组织化学与组织学相关技术课件（研究生）实验一 石蜡切片技术及HE染色.pptVIP

研究生学位课程 《免疫组化及相关组织学技术》 实验一 石蜡切片技术和HE染色 实验目的和要求 实验目的 1. 掌握石蜡切片标本制作的基本步骤。 2. 掌握HE染色的原理及过程。 重点： 1. 动物取材及固定。 2. HE染色。 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 取材 石蜡切片术（paraffin sectioning） 染色 封片 基本步骤： 一、取材 动物：小白鼠 目的器官：肝、肾、脾、肾上腺 实验用品：手术刀、剪、镊子、纱布、 固定液（10%甲醛）等 动物处死：颈椎脱臼法 1．动物处死后固定 2．用纱布或脱脂棉蘸少量生理盐水或蒸馏 水将动物胸腹部的被毛打湿 3．切开皮肤及皮下组织进行分离，打开胸 腔、腹腔 基本步骤： 一、取材 1. 取材的顺序 2. 取材大小 3. 取材严禁机械损伤 4. 注意器官的完整性 5. 消化管的取材 6. 同一固定液装多种组织时要注意加标签 7. 注明取材时间、组织名称、固定液名称、 组织块数量等 取材的注意事项： 一、取材 二、固定 目的 尽量保持组织的生前状态， 防止组织的死后变化、自溶。 作用 1．防止细胞、组织溶解及腐败，以保持细胞 与生活时的形态相似 2．保存细胞内特殊的成分，使其沉淀或凝固， 并定位在细胞内的原有部位，如蛋白质、 脂肪、糖、酶等结构尽量保持其自然状态。 作用 3．组织细胞内的不同物质经固定后可以产生不同 的折光率，造成光学上的差异，对染料也产生不同的亲和力，使得原来看不清楚的结构变清晰、容易着色，有利于区别不同的组织成分。 4．固定剂的硬化作用：可使组织细胞由正常的胶体状转变为凝胶状，增加组织的硬度，使组织不易变形，有利于固定后的处理。 二、固定 1．组织及固定液必须新鲜 2．固定液的用量一般为组织块体积的 15～20倍 3．固定的时间视组织块的种类、性质、 大小而定 固定的注意事项： 二、固定 几种常用的固定液 10％甲醛固定液 bouin固定液 苦味酸饱和水溶液 75ml 37％～40％福尔马林溶液 25ml 冰醋酸 5ml 丙酮 4%多聚甲醛 灌注固定 固定方法 三、脱水、透明及浸蜡 1. 脱水流程： 70%酒精 6h 80%酒精 6h 95%酒精Ⅰ 1h 95%酒精Ⅱ 1h 100%酒精Ⅰ 1h 100%酒精Ⅱ 1h 2.透明： 二甲苯Ⅰ 30 min 二甲苯Ⅱ 30 min 3.浸蜡： 石蜡Ⅰ 40 min 石蜡Ⅱ 40 min 石蜡Ⅲ 40 min 三、脱水、透明及浸蜡 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 取材 四、包埋（示教） 基本流程： 五、HE染色 原理： 苏木精（Hematoxylin） 伊红（Eosin） 碱性染料 紫蓝色 嗜碱性 basophilia 酸性染料 红色 嗜酸性 acidophilia 胞核中染色质和胞质中的核糖体等 胞质中的膜性结构（线粒体、溶酶体、滑面内质网和细胞外基质