临床微生物学检验：细菌耐药性检测.pptVIP

* 3_jhindler China 2009 GP * 琼脂 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 碳青霉烯酶表型检测方法-改良hodge试验 ATCC25922，0.5麦氏，1:10稀释涂MH平板 平皿中心贴10μg 厄他培南或亚胺培南纸片 10μl环挑取3-5个被测菌落从平板中心纸片边缘向平板边缘划线 被测菌株与大肠埃希菌ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强，即产碳青霉烯酶。 * * 改良hodge试验的结果判读 * * 金属酶表型检测方法：EDTA协同试验 用0.5麦氏单位的待测菌悬液涂布M H 平板。 贴IMP (10μg)纸片．距其1cm 处贴EDTA纸片（0.5mol/L 4μl）。 35℃ 过夜培养。 亚胺培南抑菌圈在靠近加EDTA纸片侧明显扩大者为产金属酶菌株。 亚胺培南 EDTA 10mm * * 何为MRS? ？ * * MRS：即对甲氧西林或苯唑西林或头孢西丁耐 药的葡萄球菌。 包 括： MRSA（methicillin resistant staphylococci) MRCNS(methcillin resistant coagulase negative staphylococci) * * 特点：MRS对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，常表现为多重耐药。 * * 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）携带SCCmec基因盒，SCCmec基因盒中的MecA基因编码修饰的青霉素结合蛋白PBP2a，这种蛋白对甲氧西林和其他的β-内酰胺类抗菌药物亲和力下降，从而导致对这些抗菌药物的耐药。 SCCmec主要由mec复合物和ccr复合物两部分组成。根据不同mec复合物和ccr复合物的组合，可以将SCCmec分成不同的型别，目前已发现8种SCCmec型。 MRS耐药机制 * * 耐甲氧西林葡萄球菌的检测 MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测PBP2a、mecA基因测定及MRSA显色培养基。 头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 对于金黄色葡萄球菌，MRSA的检测可以使用苯唑西林纸片，但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使用苯唑西林纸片。 * * MRS的检测：纸片法、盐琼脂筛选法 * * 苯唑西林纸片法判断标准： MRSA：苯唑西林纸片抑菌环直径≤10mm MRCNS：苯唑西林纸片抑菌环直径≤17mm 头孢西丁纸片法判断标准： MRSA和MRSL：头孢西丁纸片抑菌环直径≤21mm MRSCNS（除路邓葡萄球菌）：头孢西丁抑菌环直径≤24mm 盐琼脂筛选试验法判断标准： 点种细菌处出现一个以上的菌落判断为MRS * * * * 乳胶凝集试验检测MRSA * * 乳胶凝集试验检测MRSA原理： 乳胶凝集试验检测MRSA的结果： 裂解细菌 测定原理 PBP2’单抗吸附于乳胶 乳胶载体颗粒 PBP2’与含单抗的乳胶载体颗粒结合 * * 检测MRS方法及选择 MRS检测 药物 纸片法 稀释法 金黄色葡萄球菌 1mg 苯唑西林 √ √ 路邓葡萄球菌 1mg 苯唑西林 × √ 金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌 30mg 头孢西丁 √ √ 除路邓以外的凝固酶阴性葡萄球菌 1mg 苯唑西林 × √ 30mg 头孢西丁 √ × * * CNS中苯唑西林MIC结果的报告策略* 苯唑西林 MIC (μg/ml) 进行 mecA 或 PBP2a 或 头孢西丁纸片扩散 ≤0.25 ≥4.0 0.5-2.0 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 阴性 阳性 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 *检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株 * * β-内酰胺酶 β内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗菌药物的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革兰阴性杆菌间质中。常见有广谱酶、超广谱β内酰胺酶、金属酶、AmpC酶等。 检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为简单、方便、快速，应用于临床检测。 * * 头孢硝噻吩纸片法检测β-内酰胺酶（nitrocefin test) （+） * * * * * * * * * * * * * * * * * * MIC50:抑制50%试验菌株的最低药物浓度。 MIC90:抑制90%试验菌株的最低药物浓度。 * * * * 琼脂稀释法 优点：金标准 精确可靠 可同时测定多株菌（60株） 细菌生长情况可查 缺点： 测多个药时劳动强度大 制备平皿费时费力 * * E 试验（Epsilometer test） 是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特点测定细菌对抗菌药物