金黄色葡萄球菌检查法.docVIP

深圳康林生物科技有限公司 题目 金黄色葡萄球菌检查法 文件编号 SOP- 页 数 PAGE 5 / 5 深圳康林生物科技有限公司 金黄色葡萄球菌检查法 颁发部门：质量管理部 编号： SOP- 页数： PAGE 1 / NUMPAGES 5 制定人 审核人 批准人 分发部门：检验科 年 月 日 年 月 日 年 月 日 生效日期 年 月 日 目的： 建立金黄色葡萄球菌检查的标准操作程序，规范金黄色葡萄球菌检查的操作 范围： 适用于金黄色葡萄球菌检查 职责： 检验科主管、检验员 规程： 1. 简述 金黄色葡萄球菌(Staphylcoccus aureus)为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界、空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石碳酸或0。1%升汞溶液10～15min才会被杀死。 金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色镜检和血浆固酶试验等步骤进行。 本法适用于外用药品及一般滴眼剂，眼膏剂的检查。 2. 仪器、设备及用具(见大肠杆菌检查法2) 3. 试液、指示液 3.1 0。9%无菌氯化钠溶液或无菌磷酸盐缓冲液(pH7。2) ［附录3.1，3.3］ 3.2 革兰染色液 ［附录2.4，2.10，2.16］ 3.3 无菌枸橼酸钠氯化钠溶液 ［附录2.7］ 3.4 兔(或人)血浆 取20ml玻璃注射器一只，18×180mm试管及带离心管，严密包扎，灭菌备用。以无菌操作取无菌枸橼酸钠氯化钠溶液1ml于试管中。取2Kg以上家兔(雌雄均可)一只，固定于解剖台上，剪去心脏部位的毛，用碘酒。75%乙醇消毒。采血者左手拇指触摸家兔胸骨左侧，剑突一上指，心跳最明显处，用20ml注射器垂直刺入，如有回血，表明已刺入心脏。缓缓抽取9ml注入上述试管中，与抗凝剂轻轻混匀数分钟，血液应无任何程度的凝固现象。转入10ml无菌离心管，500r/min离心5min。用灭菌吸管吸取血浆移至无菌试管中，血浆宜新鲜使用，应无溶血及纤维蛋白析出现象。血浆若不能及时使用时，置冰箱内短保存备用。临用前必须用金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］和0.9%无菌氯化钠溶液，按血浆凝固酶测定法测试无假阳性及假阴性反应方可使用。 3.5 1%酚磺酞指示液 ［附录4.4］ 4. 培养基 4.1 营养肉汤培养基 ［附录5.1］ 4.2 营养琼脂培养基 ［附录5.2］ 4.3 亚碲酸盐肉汤培养基 ［附录5.15］ 4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基 ［附录5.16］ 4.5 甘露醇氯化钠脂培养基 ［附录5.17］ 4.6 血琼脂培养基 ［附录5.13］ 取营养琼脂培养基100ml，加热溶化，待冷至50℃左右，无菌操作加入5～10ml无菌脱纤维兔(或人、羊)血，摇匀，制成平板，于36℃培养箱中孵育24h，无菌生长方可使用。置冰箱内保存备用。 脱纤维血的制备。无菌操作抽取兔(或羊)血。取出血后，徐徐放入含有数粒玻璃珠的100ml灭菌锥形瓶中，轻轻振摇数分钟，至使纤维蛋白结于玻璃珠上，用灭菌吸管吸出脱纤维血于试管中，置冰箱内保存备用。采血及操作过程中严防污染。 5. 对照用菌液 取金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，对照菌加入量为50～100个(一般用量为1:1060.1ml)，同时用营养琼脂平板计数。 6. 操作方法 6.1 供试液的制备［见细菌，霉菌(酵母菌)计数5.3］ 6.2 供试液的制备［见细菌，霉菌(酵母菌)计数6.2］ 含抑菌成分供试品供试液的制备(见大肠杆菌检查法6.2.4) 6.3 增菌培养 取营养肉汤(或亚碲酸钠肉汤)培养基3瓶，每瓶100ml，2瓶分别加入10ml供试液，其中1瓶加入50～100个对照菌作为阳性对照，第3瓶加入与供试液等量的0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液(Ph7.2)作为阴性对照，置36℃±1培养18～24h(必要时可延至48h)。阴性对照应无菌生