生物技术制药：基因组编辑技术新进展.pptVIP

CRISPR/Cas系统就是其中一种由RNA介导的，可遗传的有效的获得性免疫机制，该系统主要是细菌为抵抗噬菌体或质粒所带来外源DNA片段的入侵的免疫系统[11]。 Cas基因由蓝色表示，包括广泛存在的cas1和cas2，II类系统特征基因cas9和csn2。重复间隔物阵列（CRISPR）由黑色表示。（下）CRISPR的重复序列（repeat）和间隔物序列（spacer）分别用黑色菱形、灰色长方形表示。缩写：L，前端；T，末端重复；数字代表间隔物序列被获取的顺序。 CRISPR区域第一个重复序列上游有一段CRISPR的前导序列（Leader sequence），该序列作为启动子来启动后续CRISPR序列的转录，转录生成的RNA被命名为CRISPRRNA（简称crRNA）。 根据Cas基因核心序列的不同，CRISPR/Cas系统可以分为3种不同的类型：CAS解旋和酶切的效果 。在Cascade、crRNA与Cas所组成的三元复合体的作用下，靶DNA被降解。Ⅱ型CRISPR/Cas系统与Ⅰ型和Ⅲ型系统的不同之处在于，Ⅱ型系统只需要Cas9、crRNA、反式激活crRNA(trans-encoded small RNA, tracrRNA)及RNase III的作用，便可以使靶DNA降解 * 目前，由于Ⅱ型系统与其余两种系统相比操作更为简便，因此现在常用的基因组编辑系统为Ⅱ型CRISPR/Cas系统，即CRISPR/Cas9系统。 在CRISPR/Cas9系统中，Cas9基因编码的蛋白具有解旋酶活性，为该系统中的关键蛋白，其主要包含有HNH和RuvC两个活性位点。在反应初始阶段pre-crRNA转录被出来，Cas9蛋白与RNase III对其进行加工形成成熟的crRNA，随后crRNA、Cas9与转录出来的tracrRNA结合形成复合体，该复合体识别并解开与crRNA互补的靶DNA序列，紧接着crRNA与互补的DNA链杂交，随后Cas9蛋白的HNH活性位点开始切割互补的DNA链，RuvC活性位点切割另一条游离的DNA链，从而使dsDNA断裂，从而启动细胞的HR或NHEJ机制，实现对靶基因组的编辑。 * 3 操作难度小、细胞毒性低 基因组编辑技术作为一种在功能基因组学研究中被广泛应用的方法，因其能够减弱或完全阻断目的基因的表达，通过研究生物体所发生的变化，从而推断该基因的功能。目前，已经在酿酒酵母、拟南芥、小鼠等多种模式生物中实现了目的基因组DNA的编辑，为这些模式生物中功能基因的研究做出了贡献 * 基因组编辑技术现在常常被用于建立特定基因缺失的动物模型。 例如在动脉粥样硬化动物模型构建中，ApoE和LdlR基因起到了关键性的作用。ApoE基因缺失小鼠血液中的低密度脂蛋白(low-density li-poprotein, LDL)由于无法与相关配体结合而留在了血管中，因此无论正常或者高脂饮食，均可患上严重动脉粥样硬化症。而LdlR基因缺失小鼠的细胞由于无法正常吸收血液中的LDL，使内环境中的LDL维持在了很高的水平，因此ApoE和LdlR基因缺失小鼠被广泛应用于动脉粥样硬化的研究中。 此外，基因编辑技术也可用于构建糖尿病、脊髓性肌萎缩病、帕金森病理想的动物模型。 随着人工核酸内切酶技术的出现，给基因组编辑技术在疾病治疗中的应用带来了新的希望。 CCR5是HIV病毒入侵细胞的重要辅助受体，当靶细胞缺乏CCR5时HIV病毒不能对其进行感染，通过利用ZFNs技术将艾滋病患者的诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS)中的CCR5基因突变，再进一步将该细胞诱导成造血干细胞病回输到患者体内，则有可能能够治愈艾滋病。 通过ZFNs技术诱导体外培养的帕金森患者iPS细胞后发现，可以使突变的SNCA基因恢复为正常，因此证明了该技术在帕金森病治疗中的潜在应用价值。 着色性干皮病C(Xeroderma pigmentosum group C, XP-C)是一种罕见的人类综合症，患有该病的人对紫外线非常敏感并且易患皮肤癌，通过TALENs技术可以成功地对XP-C细胞中的XPC突变基因进行矫正，因此具有治愈该病的潜力。 * 基因编辑是一项新技术， 还存在构建复杂和价格的问题， 其脱靶效应限制了其在基因治疗等应用上的发展。 在未来的发展中，基因编辑技术将成为生命科学和生物医学等领域研究与应用的重要工具. * 基因组编辑技术新进展Current Progress of Genome Editing Techniques * 3 特点比较 应用 4 5 展望 3种基因编辑技术 2 1 背景 目录 * 基因组编辑技术 针对目的基因组进行定点改造 达到对未知功能基因进行研究和基因治疗的目的。