2020区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌.pptVIP

区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌 范聪聪 目的： 用革兰氏染色法区分金黄色葡萄球和 沙门氏菌 原理： ? 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不 溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其 细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙 醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加 上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能 把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色； 而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、 肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主 的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶 紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色， 再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 药品： 金黄色葡萄球菌，沙门氏菌； 草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液， 95% 乙醇， 仪器： 载玻片，接种环，酒精灯，打火机，吸 水纸，显微镜，香柏油，擦镜纸，废水 缸 操作步骤： ? 1 ）涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上， 把沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分别涂在 两个载玻片的中央，用烧红冷却后的接 种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布 面不宜过大 2 ）干燥：将标本面向上，手持载玻片一 端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加 热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热 时间过长，以防标本烤枯而变形 ? 3 ） 固定：固定常常利用高温，手持载玻 片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处 尽快的来回通过 2-3 次，共约 2-3 秒种，并 不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉 过烫为宜（不超过 60 ℃ ），放置待冷后， 进行染色。 ? 4 ） 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶 紫 1-2 滴，使染色液覆盖涂片，流水冲洗 媒染：将碘液滴在涂片薄膜上，使染 色液覆盖涂片，流水冲洗 吸 脱色：斜置载玻片，滴加 95% 乙醇脱色， 至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时 20- 30S ，随即水洗 复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液 1-2 滴， 使染色液覆盖涂片，染色约 1min 。 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小 股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止 ? 5 ）干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴， 待标本片干后置显微镜下，用低倍镜 观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻 片上，用油镜观察沙门氏菌和金黄色 葡萄球的形态及颜色。