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3. 接种 接种鸡胚,采用绒毛尿囊腔接种,通过照胚检测鸡胚死活,在气室边缘避开胚体和血管处作一记号,作为接种的部位,碘酒、酒精消毒,并用打孔器在此处打孔;用1ml注射器吸取病毒液01ml,注射器沿小孔插入鸡胚约15cm,注入病毒液以胶布封孔,置于37℃温箱中直立培养。 4. 观察已接种鸡胚 24小时后观察鸡胚未死亡。 5. 处理已接种鸡胚 接种48小时后观察鸡胚已死,将鸡胚置4℃冷冻过夜。 6. 收胚 收获病毒液。采用无菌手术去气室顶壳,开口直径为整个气室大小,用无菌镊子撕去部分蛋膜,撕破绒毛尿囊膜而不撕破羊膜,用镊子轻轻按住胚胎,用消毒注射器吸取尿囊液,置于西林瓶中,备用。解剖胚胎。 7. 血凝及血凝抑制试验 采用1%红细胞,以及新城疫的血清和禽流感血清,按下表操作。 ① 血细胞凝集试验(HA)(单位:ūl) (表格略) * 大学语文(写作)by吴延生 * 用轻微震荡器震荡1~2min,放入37℃温箱中15~30min。判断1个单位血凝价,并配成4个单位病毒溶液。 ② 血细胞凝集抑制试验(HI)(单位∶ūl) (表格略) 用轻微震荡器震荡1~2min,放入37℃温箱中15~30min (表格略) 用轻微震荡器震荡1~2min,放入37℃温箱中15~30min。 (三) 真菌的形态观察 直接在显微镜下观察酵母菌装片、青霉菌装片、曲霉菌装片、毛霉菌装片、根霉菌装片。 六、 实验结果与分析 (一) 细菌的分离及诊断 1. 瑞氏染色后,显微镜观察到蓝色、两极浓染的球杆菌。 2. 在血琼脂平板上培养24小时后,长出灰白色、湿润、有光泽、露珠状的小菌落。 3. 对血琼脂平板上的菌体革兰氏染色后,显微镜观察到红色、两极浓染的球杆菌。 4. 在营养肉汤中培养24小时后,原本清亮的液体变为浑浊,说明菌体在营养肉汤中大量繁殖。 5. 对营养肉汤中的菌体革兰氏染色后,显微镜观察到红色、两极浓染的球杆菌,说明该菌是革兰氏阴性菌。 6. 生化试验结果: (表格略) * 大学语文(写作)by吴延生 * 三糖铁琼脂:培养基底部变黄,说明产酸,但不产气,不产硫化氢,可能被污染; 麦康凯平板:不生长; 葡萄糖生化管:由原本的紫色变为黄色; 蔗糖生化管:由原本的紫色变为黄色; 乳糖生化管:原来的紫色变浅; 甘醇生化管:由原本的紫色变为黄色; 靛基质生化管:滴加指示剂后,产生玫瑰红色; 硫化氢生化管:由于缺乏硫化氢指示剂,无法对硫化氢一项做出判定,该培养管并未变色。 7. 氧化酶和触酶实验:氧化酶试纸变紫色,为阳性;而触酶试验产生气泡,为阳性。 以上结果与课本对照后较为接近,极有可能是巴氏杆菌。 (二) 病毒的实验诊断 1. 24小时后检查鸡胚未死亡,说明实验操作严格无菌操作,未感染其他细菌。 2. 鸡胚收获及解剖 打开蛋壳后,提取病毒。同时接种老师提供的病毒。 3. HA试验: HA试验结果如下表(结果第一排为自己所收病毒液,第二排为老师所给病毒): (表格略) * 大学语文(写作)by吴延生 * 结果:自己所收病毒血凝价为1∶256。老师所给病毒血凝价为1∶128。 4. HI试验 HI试验结果如下表(结果第一排为自己所收病毒液,第二排为老师所给病毒): (表格略) 结果:自己所收病毒的HI效价为1∶32。老师所给病毒的HI效价为1∶128。 (三) 真菌的形态观察(略) 七、 实验总结 1. 通过本次实验可了解并熟悉检验位置菌种的方法,推断菌种时要综合分析可能污染杂菌的实验要重复进行。病毒的接种及吸取尿囊液时,要注意保持无菌操作,以防带进其他细菌,影响实验结果。 2. 在实验过程中,我就被灌输了很强的意识:一进到实验室中,就要尽可能地做好一切保护措施,这是保护自己的基本条件和要求。 3. 实验中所涉及的基本实验操作,我们都要清楚了解并且知道其中的原理,这对于我们来说尤为重要。 4. 实验中必然会遇到一些自己难以理解的问题,这要求我们要与指导老师做好沟通工作,并且要加强团队合作精神与加深自立意识,加强自我的动手能力。 * 大学语文(写作)by吴延生 * 5. 通过本次综合实验,我们巩固了本学期所学的普通培养基制备和鲜血培养基的制备,光学显微镜油镜的使用,细菌片的分离培养鉴定技术,病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种、胚液的收集)病毒的血凝试验和血凝抑制试验方法。提高我们综合运用兽医微生物学所学知识的能力、实际动手能力及观察、分析问题的能力。 _______________________________________________________________指导老师评语及成绩: 成绩: 指导老师签名: ______________________________________________________
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