纤维素内切模拟酶的仿生印迹与性能研究.pdf

摘要 摘 要 化学模拟酶与天然酶相比，具有高度的稳定性和长的使用寿命。研究制备简 单、稳定性好、成本低，既具有预定选择性又具有与酶、受体和抗体相类似的主 客体分子仿生模型已成为研究的热点。分子印迹技术的出现为模拟酶的研究提供 了新的技术途径。本论文采用化学方法合成出新型交联功能单体N，O-双异丁 烯酰-L-苯丙氨酸和新型交联功能单体N，O-双异丁烯酰-L-酪氨酸甲酯，并应用 新型交联功能单体N，O-双异丁烯酰-L-苯丙氨酸制备出纤维素内切模拟酶用于 酶催化研究，主要研究内容如下： 1. 以L-苯丙氨醇和甲基丙烯酸和L-酪氨酸甲酯分别为原料，甲基丙烯酸为 单体，4-二甲基氨基吡啶和二环己基碳二亚胺为催化剂和稳定剂，通过酰胺化反 应分别合成出新型交联功能单体N，O-双异丁烯酰-L-苯丙氨酸和新型交联功能 单体N，O-双异丁烯酰-L-酪氨酸甲酯。采用薄层色谱对反应发生的过程监控， 硅胶柱层析色谱方式对产物分离纯化，红外光谱对新型交联功能单体的结构性质 和特征基团进行归属，核磁共振氢谱和碳谱对交联功能单体的氢原子和碳原子进 行解析，准确合成出两种新型交联功能单体。 2. 以新型交联功能单体N，O-双异丁烯酰-L-苯丙氨酸和4-乙烯基苯硼酸 为功能单体，D-麦芽糖为模板分子，偶氮二异丁腈为引发剂，乙二醇二甲基丙 烯酸酯为交联剂，沉淀聚合法成功制备出纤维素内切模拟酶，通过扫描电镜、傅 里叶红外光谱和热稳定性对其形貌特征、结构基团和热稳定性进行表征，并通过 3,5-二硝基水杨酸 （3，5-dinitrosalicylic acid）DNS 比色法和质谱检测对其催化 性能进行研究。结果表明MIPs 空间结构比NIPs 空隙大，更易吸附模板分子D- -1 麦芽糖。傅里叶红外光谱结果中，在3541cm 处–OH 的特征峰位置，MIPs 中 模板分子D-麦芽糖与功能单体之间氢键相互作用，使–OH 的吸收峰强度产生变 化，吸收强度明显大于NIPs，用于特异性识别模板分子D-麦芽糖。热稳定性分 析表明，MIPs 和NIPs 的吸热与放热过程基本一致，但NIPs 出现相态转变较 快，热稳定性不如MIPs 高。3，5-二硝基水杨酸 （DNS）比色法测MIPs、NIPs 催化底物产生的还原糖，得出底物羧甲基纤维素钠水溶液浓度在0.3mg/mL 时， MIPs 和NIPs 催化底物的效果最优异。质谱对MIPs 和NIPs 的催化产物检测， 从总离子流程图中可以看出MIPs 催化产物中质核比 （m/z）在341.02 处存在明 显优势强度，NIPs 催化产物溶液总离子流程图中质核比 （m/z）无明显优势强 度，结果表明MIPs对底物催化性能良好，明显高于NIPs。 I 摘要 本文设计以新型交联功能单体N，O-双异丁烯酰-L-苯丙氨酸和4-乙烯基苯 硼酸为功能单体，D-麦芽糖为模板分子，分子印迹沉淀聚合法成功制备出纤维 素内切模拟酶。研究其催化水解底物羧甲基纤维素钠性能表明，纤维素内切模拟 酶MIPs 催化性能良好，明显高于非分子印迹模拟酶NIPs。本研究开发了一种简 单、廉价的用于催化水解多糖的印迹模拟酶，在模拟酶催化方面取得一定的进 展，为模拟酶的仿生构建提供新的技术途径。所研制的模拟酶有助于生物质能源 的开发和利用，具有广阔的应用前景和重要的实用价值，对于能源的循环利用、 环境保护和社会发展也具有重要意义。 关 键 词：分子印迹；模拟酶；催化 论文类型：研究类 选题来源：国家自然基金项目 II 目 录 目 录 1 1 第 章 绪论 1.1 分子印迹模拟酶的构建策略1 1.1.1 印迹过渡态类似物1 1.1.2 印迹底物或底物类似