磁性氧化石墨烯--荧光标记法快速检测鸡肉中沙门氏菌的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 鸡肉中常见的致病菌为沙门氏菌，沙门氏菌是一种能够引起人畜共患病和食 物中毒的食源性病原菌，由其所引起的食品安全事件在我国乃至世界全球范围内 一直高居首位，导致人、畜的生命健康受到了严重的威胁。鸡肉营养成分丰富是 沙门氏菌主要的传播媒介之一，沙门氏菌的灵敏、准确快速检测能够预防与控制 沙门氏菌的传播和蔓延，进而确保鸡肉制品的质量安全。因此，本课题建立一种 磁性氧化石墨烯-荧光标记法用于快速检测鸡肉中的沙门氏菌。首先以化学共沉 淀法制备的磁性氧化石墨烯复合材料（Fe O /GO ）为荧光猝灭剂，并对其形貌 3 4 结构进行表征；同时，探讨 Fe O /GO 对沙门氏菌荧光探针的猝灭机理。在此基 3 4 础上，利用所建立的 Fe O /GO-荧光标记法对沙门氏菌目标 DNA 的检测条件进 3 4 行研究。最后对鸡肉样品中沙门氏菌的消长规律进行分析，并将所建立的快速检 测方法用于检测实际鸡肉样品中的沙门氏菌，以期实现沙门氏菌的高灵敏快速检 测，主要研究内容和结果如下： （1）Fe O /GO 的制备及其对沙门氏菌荧光探针猝灭机理分析。通过扫描电 3 4 镜（SEM ）、透射电镜（TEM ）、X-射线衍射（XRD ）、傅里叶变换红外光谱 （FT-IR ）及拉曼光谱（Raman ）对 Fe O /GO 和氧化石墨烯（GO ）的结构进行 3 4 对比表征，结果表明：Fe O 磁性纳米粒子负载在 GO 表面，Fe O /GO 已成功合 3 4 3 4 成。以 Fe O /GO 为荧光猝灭剂，荧光探针为荧光剂，通过荧光、紫外吸收光 3 4 谱，结合 Stern-Volmer 方程及 Lineweaver-Burk 双倒数曲线方程，对其荧光猝灭 机理进行初步分析，结果表明：Fe O /GO 具有荧光猝灭作用，当 Fe O /GO 浓度 3 4 3 4 -4 为 3.2 ×10 g/mL 时，荧光猝灭率可达 96.86% ，其猝灭机理为静态猝灭。 （2 ）Fe O /GO-荧光标记法检测沙门氏菌目标 DNA 的研究。以沙门氏菌目 3 4 标 DNA 序列为待测物，利用 Fe O /GO-荧光标记法对沙门氏菌目标 DNA 的检 3 4 测条件进行了确定，结果表明：Fe O /GO 与沙门氏菌荧光探针反应时间 60 3 4 min 、反应pH7.4 、DNA 探针杂交时间 120 min、释放探针浓度 40 pmol/L 、富集 倍数为 5 倍，沙门氏菌目标 DNA 浓度与荧光强度在 0.005～1 pmol/L 范围内呈 2 良好的线性关系，线性回归方程y =7.0659x+2.6147 ，R =0.9981 （x 为沙门氏菌目 标 DNA 浓度，y 为相对荧光强度 F/F0 ），检出下限为 5 fmol/L （S/N=3 ）。11 次重复 0.01 pmol/L 沙门氏菌目标 DNA 浓