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GbWRKY1 在棉花磷稳态和多抗反应中的作用机制研究 目录 摘要i Abstract iii 缩略语表vi 1 前言 1 1.1 植物的磷饥饿反应及其信号转导 1 1.1.1 磷元素和磷饥饿响应概述 1 1.1.2 磷饥饿的局部反应2 1.1.3 磷饥饿的系统性反应3 1.1.4 SPX 结构域是真核细胞中感知磷的受体5 1.2 植物的先天免疫9 1.3 磷饥饿反应和植物免疫反应间的互作研究进展 11 1.4 棉花抗黄萎病的机制 14 1.4.1 棉花黄萎病概述 14 1.4.2 棉花对黄萎病菌的组织结构抗性 14 1.4.3 茉莉酸在棉花抗黄萎病中的作用 15 1.5 问题的由来与已有研究基础 16 1.6 本研究的目的与意义 17 2 材料与方法 18 2.1 实验材料 18 2.2 实验方法 18 2.2.1 盆栽实验 18 2.2.2 水培和砂培实验 19 2.2.3 无机磷和总磷含量的测定 19 2.2.4 总RNA 的提取、反转录和荧光定量PCR20 2.2.5 黄萎病菌接种和病指统计方法20 2.2.6 真菌生物量检测和恢复培养21 I 华中农业大学2019 届博士研究生学位（毕业）论文 2.2.7 棉花内源激素和黄酮化合物含量的测定21 2.2.8 木质素和黄酮的组织化学染色22 2.2.9 总酚、总黄酮以及木质素含量的测定22 2.2.10 棉花叶片甲醇提取物的抑菌实验23 2.2.11 转录组和代谢组测定流程和数据分析24 2.2.12 丙二醛含量和相对电导率测定24 2.2.13 酵母双杂交（Y2H ）实验25 2.2.14 双分子荧光互补实验25 2.2.15 拟南芥JAZ1 的CRISPR 载体构建与靶点编辑检测26 2.2.16 蛋白的原核表达26 2.2.17 蛋白的烟草瞬时表达和Western 检测26 2.2.18 双荧光素酶报告基因（DLR ）实验27 3 结果与分析27 3.1 GbWRKY1 在棉花低磷胁迫中的功能分析27 3.1.1 全生育期正常磷和低磷的盆栽实验27 3.1.2 苗期不同磷水平下的砂培实验29 3.1.3 苗期正常磷和低磷的水培实验30 3.2 低磷胁迫对棉花黄萎病抗性的影响及其机制探讨32 3.2.1 低磷下棉花对黄萎病菌的抗性显著增强32 3.2.2 低磷胁迫下棉花叶片的转录组分析33 3.2.3 低磷胁迫下棉花叶片的代谢组分析36 3.2.4 低磷下木质素和黄酮含量显著增加38 3.2.5 低磷下棉花积累抑菌次生代谢物39 3.2.6 低磷下棉花的茉莉酸信号路径被激活39 3.2.7 GbWRKY1 对低磷处理下抗病性增强的影响探讨40 3.3 GbWRKY1 在盐和干旱胁迫中的功能鉴定42 3.3.1 GbWRKY1 逆境处理的表达模式42 3.3.2 GbWRKY1 超表达拟南芥对氯化钠和甘露醇