拟南芥钙离子依赖蛋白激酶CPK5_6磷酸化几丁质受体调控免疫反应的研究.pdfVIP

拟南芥钙离子依赖蛋白激酶CPK5/6 磷酸化几丁质受体调控免疫反应的研究 目录 摘要i 缩略表v 第一章 植物免疫系统的研究综述 1 1. 植物PTI 免疫系统 2 1.1 模式识别受体 2 1.1.1 PRRs 及对应PAMPs 4 1.1.2 PRRs 受体复合体及下游信号组分 8 1.2 植物PTI 其他免疫反应 9 1.2.1 MAPK 级联反应 9 2+ 1.2.2 ROS, Ca 爆发 11 1.3 植物PTI 反应调控 12 1.3.1 磷酸化和去磷酸化在PTI 中的功能 12 1.3.2 泛素化修饰在PTI 信号通路中的影响 13 2. 植物的ETI 调控系统 14 2.1 效应蛋白对植物PTI 的影响 14 2.1.1 效应蛋白对PRRs 的抑制作用 14 2.1.2 效应蛋白对MAPK 级联反应的影响 15 2.2 植物体内的R 基因及对应的效应蛋白识别 15 3. 钙调蛋白的功能研究 18 3.1 植物中受钙离子调节的蛋白激酶 18 3.2 CDPKs 在植物中的功能研究 18 4. 研究目的和意义21 第二章材料和方法22 1.1 质粒载体和菌株22 1.2 拟南芥的种植和生长管理23 1.2.1 材料23 1.2.2 方法23 1.3 拟南芥稳定转化23 1.3.1 材料和试剂23 1.3.2 载体构建23 1.3.3 拟南芥稳定转化25 I 华中农业大学博士研究生学位论文 1.4 亲和纯化LYK5-Myc 受体复合体蛋白25 1.4.1 试剂和材料25 1.4.2 实验方法25 1.5 双分子荧光互补实验26 1.5.1 载体构建27 1.5.2 在烟草叶片中瞬时表达分析27 1.6 蛋白免疫印迹实验27 1.6.1 SDS凝胶制备27 1.6.2 转膜28 1.6.3 孵育抗体和曝光29 1.7 免疫共沉淀实验29 1.7.1 试剂与材料29 1.7.2 方法与步骤29 1.8 体外蛋白纯化实验30 1.8.1 载体构建31 1.8.2 转化E. coli BL21 Condon Plus (DE3) 菌株31 1.8.3 蛋白诱导表达检测31 1.8.4 体外亲和纯化标签蛋白质32 1.9 体外磷酸化实验33 1.9.1 试剂和材料33 1.9.2 步骤33 1.10 荧光定量分析基因相对表达33 1.10.1 RNA 提取33 1.10.2 RNA 反转录cDNA34 1.10.3 qRT-PCR 反应34 1.10.4 qRT-PCR 数据分析35 1.11 活性氧测定35 1.11.1 试剂及材料35 1.11.2 步骤35 1.12 胼胝体沉淀染色36 1.12.1 试剂和材料36 1.12.2 实验步骤36 第三章 结果与分析37 II 拟南芥钙离子依赖蛋白激酶CPK5/6 磷酸化几丁质受体调控免疫反应的研究 1. 鉴定与 LYK5 互作的蛋白37 2. CPK5