牛支原体强弱菌株感染对犊牛免疫反应及其外周血单个核细胞转录谱调节的研究.pdfVIP

牛支原体强弱菌株感染对犊牛免疫反应及其外周血单个核细胞转录谱的调节研究 目 录 摘 要 i Abstract v 缩略语表（Abbreviation ）xi 1 文献综述 1 1.1 牛支原体病原学 1 1.2 牛支原体病临床特征 2 1.2.1 牛支原体病流行病学 2 1.2.2 牛支原体病临床症状和病理变化 3 1.2.3 牛支原体病的诊断 4 1.3 牛支原体病的防控现状和面临的问题 5 1.3.1 牛支原体病的防控现状 5 1.3.2 牛支原体病的耐药性 6 1.3.3 牛支原体疫苗的研究进展 7 1.3 支原体的致病机制 12 1.3.1 粘附 12 1.3.2 侵袭 13 1.3.3 逃避宿主防御机制，胞内持续存在和扩散 14 1.3.4 次级代谢产物和生物被膜的形成 17 1.3.5 支原体表面脂蛋白及其在致病过程中的作用 19 1.4 宿主对支原体免疫应答的研究进展 20 1.4.1 天然免疫 21 1.4.2 体液免疫 22 1.4.3 细胞免疫 23 1.4.4 免疫抑制应答 29 1.5 牛支原体研究展望 30 1.6 本研究目的与意义 30 2 牛支原体强弱菌株对犊牛体液免疫和细胞免疫反应的研究 32 I 华中农业大学2019 届博士研究生学位（毕业）论文 2.1 前言32 2.2 材料33 2.2.1 主要试剂及试剂盒33 2.2.2 主要溶液及配制方法33 2.2.3 主要仪器33 2.3 方法34 2.3.1 实验动物与分组34 2.3.2 临床指标记录34 2.3.3 实验菌株及其准备35 2.3.4 动物接种35 2.3.5 样品采集35 2.3.6 牛支原体分离培养方法36 2.3.7 大体病变评价和肺部病变评价37 2.3.8 牛支原体强弱菌株对犊牛血清、唾液及鼻腔灌洗液各种抗体水平的影响38 2.3.9 外周血单个核细胞的分离40 2.3.10 刺激蛋白的制备与体外刺激实验41 2.3.11 MTT 法检测牛支原体强弱菌株对犊牛PBMC 的细胞活力影响41 2.3.12 Annexin-V/PI 检测牛支原体强弱菌株对犊牛PBMC 的凋亡反应42 2.3.13 检测牛支原体强弱菌株对犊牛PBMC 中T 细胞分化的影响42 2.3.14 检测牛支原体强弱菌株对全血培养上清中细胞因子的影响42 2.3.15 病理组织学切片43 2.3.16 组织免疫组化44 2.3.17 数据处理与分析45 2.4 实验结果45 2.4.1 犊牛临床症状分析45 2.4.2 犊牛临床排菌分析47 2.4.3 犊牛大体病变和肺部病变观察48 2.4.4 病理学观察50 2.4.5 犊牛器官带菌分析51 II 牛支原体强弱菌株感染对犊牛免疫反应及其外周血单个核细胞转录谱的调节研究 2.4.6 犊牛体液免疫变化分析 51 2.4.7 犊牛外周血单个核细胞（PBMC ）增殖分析 54 2.4.8 犊牛PBMC 凋亡分析 55 2.4.9 犊牛PBMC 中T 淋巴细胞分化的分析 56 2.4.10 犊牛血液刺激上清细胞因子检测 58 2.5 讨论 59 2.5.1 牛支原体强弱菌株及不同接种途径对犊牛临床症状及排菌的影响 60 2.5.2 牛支原体强弱菌株及不同接种途径对犊牛体液免疫的影响 62 2.5.3 牛支原体强弱菌株及不同接种途径对犊牛PBMC 增殖、凋亡及细胞