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三个ROS 应答基因在流胶病菌侵染桃树过程中的功能分析 目录 摘要i ABSTRCT iii 缩略词表vi 第一章 前言 1 1 研究问题的由来 1 2 文献综述2 2.1 桃流胶病研究进展2 2.2 活性氧在植物病害发生中的作用研究7 3 研究目的和意义 12 第二章 桃流胶病发病过程中ROS 代谢变化研究 14 1 引言 14 2 材料与方法 15 2.1 实验设计和材料准备 15 2.2 生理指标测定 16 2.3 RNA 提取、cDNA 合成和qRT-PCR 17 2.4 统计分析 18 3 结果与分析 18 3.1 桃当年生枝条的发病症状 18 3.2 超氧阴离子、过氧化氢和丙二醛含量变化 19 3.3 ROS 合成相关基因表达分析21 3.4 桃抗氧化酶活性及其编码基因的表达分析22 3.5 桃抗氧化物质AsA 和GSH 含量变化24 3.6 桃流胶病菌Lasiodiplodia theobromae ROS 消除相关基因的表达分析25 3.7 植物激素合成相关基因的表达分析26 3.8 植物抗性相关基因的表达分析28 4 讨论29 4.1 ROS 的合成与其主要来源29 4.2 桃ROS 消除机制探讨30 4.3 L. theobromae ROS 消除机制探讨31 4.4 桃抗性响应作用探讨32 5 本章小结33 第三章 转录因子LtAP1 在致病过程中的功能分析34 1 引言34 2 材料与方法35 2.1 实验材料35 2.2 LtAP1 基因克隆与蛋白质序列分析37 2.3 基因组DNA 、RNA 提取及cDNA 的制备38 2.4 桃流胶病菌LtAP1 基因缺失突变体和互补菌株的创制38 2.5 LtAP1 敲除突变体表型观察54 2.6 LtAP1 敲除突变体对外界环境胁迫应答分析54 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 2.7 ΔLtAP1 突变体致病力分析55 2.8 实时定量PCR 分析56 2.9 统计分析56 3 结果与分析56 3.1 LtAP1 结构特征分析56 3.2 氧化剂对LtAP1 的诱导表达分析59 3.3 LtAP1 基因的敲除及互补验证60 3.4 LtAP1 基因敲除对L. theobromae 营养生长的影响61 3.5 LtAP1 负调控L. theobromae 对高盐、高渗透压胁迫的耐受性62 3.6 LtAP1 基因敲除影响L. theobromae 对氧化剂的耐受性64 3.7 LtAP1 基因影响L. theobromae 对氧化-硝化胁迫的敏感性66 3.8 LtAP1 基因参与L. theobromae 的致病性67 3.9 LtAP1 基因参