捻转血矛线虫H11和CAP蛋白的免疫保护效果研究.pdfVIP

捻转血矛线虫H11 和CAP 蛋白的免疫保护效果研究 目录 目录I 中文摘要I Abstract III 缩略语表 VI 1 文献综述 1 1.1 捻转血矛线虫概述 1 1.1.1 捻转血矛线虫的危害 1 1.1.2 捻转血矛线虫的生活史 1 1.1.3 捻转血矛线虫病的临床症状与病理特征 2 1.1.4 捻转血矛线虫病的防控 3 1.2 捻转血矛线虫的候选抗原 4 1.2.1 H11 分子的研究进展 5 1.2.2 CAP 分子的研究进展 6 1.3 CHO 细胞概述 8 1.3.1 CHO 细胞的历史及种类 8 1.3.2 CHO 细胞的优缺点 11 1.3.3 CHO 细胞表达系统的应用 11 1.4 利用细胞工程技术改造CHO 细胞是未来的研究方向 12 1.4.1 CRISPR 系统的概述 13 1.4.2 影响CHO 细胞表达产量的基因的改造 14 1.4.3 影响CHO 细胞糖基化的基因的改造 15 2 研究的目的与意义 17 3 材料与方法 18 3.1 实验动物、细胞、虫株及菌株 18 3.2 主要仪器和试剂 18 3.2.1 主要仪器 18 3.2.2 主要材料及试剂 18 3.2.3 主要溶液的配制 19 3.3 试验方法 21 3.3.1 捻转血矛线虫感染模型的建立 21 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 3.3.2 捻转血矛线虫各时期虫体的收集 21 3.3.3 捻转血矛线虫iL3 gDNA 的提取及鉴定 22 3.3.4 捻转血矛线虫RNA 的提取的cDNA 的合成 22 3.3.5 Hc-H11-2 、Hc-cap-35、Hc-cap-37 及Hc-cap-45 cDNA 的获取 23 3.3.6 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 25 3.3.7 PCR 产物纯化及回收 25 3.3.8 大肠杆菌感受态细胞DH5α 制备 26 3.3.9 目的片段的连接与转化 26 3.3.10 菌液PCR 鉴定 27 3.3.11 碱性裂解法提取质粒 27 3.3.12 构建含信号肽的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Hc-cap-35-原始/lgK/GL 和pcDNA3.1(+)-Hc-H11-2-原始/lgK/GL 28 3.3.13 去内毒素真核质粒的大量提取 32 3.3.14 贴壁CHO 细胞的复苏、传代培养和冻存 33 3.3.15 贴壁CHO 细胞的转染 34 3.3.16 细胞蛋白的收集 34 3.3.17 悬浮CHO 细胞的复苏和传代培养 35 3.3.18 悬浮CHO 细胞的转染 36 3.3.19 原核表达载体pE-sumo-Hc-cap-35、pE-sumo-Hc-cap-37 及pE-sumo- Hc-cap-45 的构建 36 3.3.20 pE-sumo-Hc-cap-35、pE-sumo-Hc-cap-37 和pE-sumo-Hc-cap-45 的诱 导表达和纯化 38 3.3.21 蛋白的浓缩 39 3.3.22 BCA 试剂盒测定蛋白浓度 40 3.3.23 CHO 表达H11-2 蛋白和原核表达CAP-35/37/45 蛋白免疫山羊进行动 物试验 40 4 结果与分析 42 4.1 贴壁CHO 细胞的蛋白表达 42 4.1.1 捻转血矛线虫Hc-H11-2 和Hc-cap-35 基因序列分析 42 4.1.2 Hc-c