鳜鱼leptina和leptinb对糖脂代谢调控机制的研究.pdfVIP

目 录 摘 要i Abstractiv 缩略语表vii 第一章 文献综述1 1leptin 及其受体的研究概述1 1.1leptin 及其受体基因的发现1 1.2leptin 及其受体基因的分子结构2 1.3leptin 及其受体基因的组织分布3 2leptin 生物学功能4 2.1leptin 对摄食和体重的调控作用4 2.2leptin 对糖类代谢的调控作用4 2.3leptin 对脂类代谢的调控作用6 2.4 其他生物学功能6 3leptin 的信号转导途径6 4 本研究目的与意义7 第二章 鳜鱼不同亚型leptin 受体的克隆8 1 前言8 2 材料与方法9 2.1 主要仪器及试剂9 2.2 鳜鱼leptin 受体3’ 末端克隆10 2.3 不同亚型leptin 受体基因序列和氨基酸序列分析15 2.4 leptin 受体进化树分析15 3 结果与分析15 3.1鳜鱼leptin 受体3’末端克隆15 3.2 鳜鱼leptin 受体基因序列分析16 3.3leptin 受体氨基酸多重比对和进化树分析18 4 讨论21 第三章 鳜鱼leptin a和leptinb 对糖代谢的调控23 1 前言23 2 材料与方法24 2.1 主要仪器及试剂24 2.2 实验设计26 2.3 鳜鱼肝脏原代细胞分离与培养27 2.4 细胞活力分析27 2.5 脂滴BODIPY 493/503染色28 2.6RNA 的提取、第一链cDNA 合成及荧光定量PCR28 2.7 数据统计与分析30 3 结果与分析30 3.1葡萄糖对肝细胞糖代谢相关基因表达的影响30 3.2leptin a 和leptinb 对不同浓度葡萄糖培养的肝细胞糖代谢的影响32 4 讨论34 第四章 鳜鱼leptin a和leptinb 对脂代谢的调控37 1 前言37 2 材料与方法38 2.1 主要仪器及试剂38 2.3 实验设计41 2.4 鳜鱼肝脏原代细胞高脂模型的构建41 2.5 荧光定量PCR43 2.6 蛋白质免疫印迹分析44 2.7 数据统计与分析46 3 结果与分析46 3.1鳜鱼肝脏原代细胞高脂模型的构建46 3.2 鳜鱼leptin a 和leptinb 对脂肪蓄积肝细胞糖脂代谢的影响50 4 讨论54 第五章 结论与展望56 在读期间科研成果57 参考文献58 致 谢73 鳜鱼leptin a和leptinb 对糖脂代谢调控机制的研究 摘 要 瘦素 (leptin) 作为肥胖基因 (obesity gene,ob) 编码的产物，可通过与瘦素受体 (leptinreceptor,LepR)结合来发挥多种生物学功能，尤其是在调节能量稳态方面起着 (Sinipercachuatsi) leptin a leptinb 重要作用。本研究探讨了鳜鱼 和 对糖脂代谢的调 控作用，解析leptin a 和leptinb 的功能分化，并为阐明鱼类leptin 对代谢调控的作 用机制提供资料。 6 leptin 实验一，哺乳动物中存在 种 受体亚型，而目前仅在少数鱼类中鉴定出 多个受体亚型，并发现lepr 短型受体在鱼类能量稳态中发挥作用。为了探索鳜鱼lepr 是否存在不同的可变剪切亚型，进一步为研究鳜鱼leptin a 和leptinb 的功能奠定一 定基础，我们在鳜鱼基