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白细胞分类计数标准操作程序 一.目的：规范白细胞手工分类标准操作二.适用范围：适用于镜下白细胞分类 三.支持性文件：全国临床检验操作规程第三版四.原理：血涂片瑞氏染色分类法 五.仪器： OLYMPUS 显微镜 六.试剂：瑞氏—姬姆萨复合染色液 I 液：取瑞氏染粉 1g、姬姆萨染粉 0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇  (分析纯 )，研磨片刻， 吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇 500ml 。 收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇 3min ，共 5 天，以后存放一周即能使用。 Ⅱ液：pH6 ．4— 6．8 磷酸盐缓冲液， 磷酸二氢钾 (无水 ) 6．64g，磷酸氢二钠 (无水 ) 2．56g， 加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整 pH，加水至 1000ml 。 七.样本要求：静脉采血使用 EDTA-K2 抗凝。毛细血管采血应擦去第一滴血， 以免混入组织 液影响结果。 八.操作步骤： 1．采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。 2．推好的血膜在空气中晃动， 以促使快干。 天气寒冷或潮湿时， 应于 37C 温箱中保温促干， 以免细胞变形缩小。 3．染 色 (1) 瑞氏—姬姆萨染色法：平置玻片于染色架上，滴加染液  3～ 5 滴，使其迅速盖满血膜，约 lmin 后，滴加缓冲液 5～ 10 滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气， 与染液充分混和， 5～lOmin 后用水冲去染液，待干。 4、先在低倍镜下浏览全片，了解染色的好坏和细胞分布情况，观测有无异常细胞。 5．选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数 100 个白细胞，按其形态特征进 行分类计数，求出各类细胞所占比值 (百分率 )。 6.结果输入上海新和中文操作系统打印报告。 九.参考范围： 见表 l— l— 1。 表 1— 1— 1 白细胞分类计数参考值 细胞类别 成人 中性粒细胞 杆状核  0.01-0.05(1%-5%) 分叶核 0.50-0.70(50 ％～ 70％ ) 嗜酸性粒细胞 0.005-0.05(0 ． 5％～ 5％ ) 嗜碱性粒细胞 0-0.01 (0 ％～ 1％) 淋巴细胞 0.20-0.40(20% ～ 40%) 单核细胞 0.03-0.10 (3 ％～ 10％ ) 十.注意事项： 1．要避免重复计数，玻片应由血膜边缘向中央依次上下呈曲线移动。 2. 白细胞总数超过 20X109 ／ L, 应分类计数 200 个细胞。白细胞数明显减少的血片，可检查 多张血片。 3．白细胞形态变化较大，应经常由高年资检验人员进行核实，以减少误差。 4．禁止在计数池内或涂片下用高倍镜作白细胞分类。