槐花实验设计实施方案.docVIP

槐花药材的含量测定及方法学验证 1仪器试剂 1.1实验仪器 仪器名称 规格 数量 备注 药勺 2 容量瓶 25 ml 16 胶头滴管 2 移液管 10ml 3 移液管 1ml 4 移液管 2ml 2 移液管 5ml 2 具塞锥形瓶 150ml 12 漏斗 1 烧杯 100ml 3 烧杯 250ml 2 容量瓶 100ml 12 量筒 100ml 1 量筒 10ml 1 玻璃棒 2 洗耳球 2 1. 2实验试剂 试剂名称 试剂原材料 配置方法 备注 60%乙醇溶液 10%硝酸铝溶液 9水硝酸铝18.75g 蒸憾水87.75g 电子天平称取九水硝酸铝18.75g于 100ml S瓶中，加入蒸憾水87.75g, 混匀，既得。 5%亚硝酸钠溶液 亚硝酸钠5.00g 蒸憾水95ml 电子天平称量5.00g亚硝酸钠至于 100ml烧杯中，加适1■水溶解，冷却 至室温，转移进入100ml容量瓶，用 剩余蒸憎水定容至刻度线。 10%氢氧化钠溶 液 氢氧化钠25.00g 蒸憎水225ml 电子天平称量25.00g氢氧化钠置于 100ml烧杯中，加适量水溶解，冷却 至室温，转移进入250ml容量瓶，用 剩余蒸懈水定容至刻度线。 溶解时 候放热 槐花药材 足量 芦丁对照品 足量 2实验内容 2.1线性范围考察 2.1.1对照品溶液的制备 取芦丁对照品50mg,精密称定，置于25ml量瓶，加60%乙醇适量，置水浴上超声 微热溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至 刻度，摇匀，即得浓度为0. 2mg/ml的芦丁对照品溶液。 2.1. 2检测波长的选择 取对照品溶液，在dOOnnfeOOnm波长进行光谱扫描，以光谱图最大吸收作为选定波 长。 图1扫描光谱图 2.1.3标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0ml, lml, 2ml, 3ml,4ml, 5ml, 6ml,,分别置于7个25ml量瓶中, 各加水使成6ml,精密加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝 1. 0ml,摇匀,放置6分钟,加入10%氢氧化钠试液10. 0ml,加水稀释至刻度，摇匀, 放置15分钟（对照品既为空白溶液）。按照紫外可见分光光度法，在选定波长处 测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 表1标准曲线数据记录 浓度C 0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048 mg/ml 吸光度A 图2芦丁标准曲线图 2. 2槐花总黄酮含量的测定 2. 2.1供试品溶液的制备 将槐花研碎，取粗粉约lg,精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇100ml, 称定重量，60°C超声30分钟，用60%乙醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液10ml,置 100讷量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2. 2. 2含量测定 精密量取上述供试品溶液3ml,置25ml量瓶中，加水至（ 5. 0ml,加5%亚硝酸钠溶液 1. 0ml,混匀，放置6min,加10%硝酸铝溶液1. 0ml,摇匀， 放置6min,加氢氧化钠试 液10. 0ml,再加水至刻度，摇匀，放置15inin,以相应的试齐 1」为空白，在选定波长处测 定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（U 干燥品计算，含总黃酮以芦丁 （C27II30016）计,槐花不得少于8. g）,计算，即得。本品按 0%；槐米不得少于20. 0%。 表2槐花夯材含量测定数据记录 样品浓度C （mg/ml） 3 平均值 吸光度A 浓度 C （mg/ml） 百分含量（％） 2.3方法学考察 2. 3.1加样回收试验 以测定芦丁含量为准，采用加样回收实验。取样品3份, 精密称定0.50份，精密 加入芦丁对照品适量（相当于测定含量的80%、100%、120%） 瓶中，加60%乙醇100ml, 60C超声30分钟，摇匀，过滤，耳 平行三次，置于具塞锥形 E续滤液10ml,置于100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml,置于25ml ■ 容量瓶中，加水使成6i】il, 精密加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀，放置6分钟，再加10 %硝酸铝1.0ml,摇匀，放 置6分钟，加入氢氧化钠试液10. 0ml,加水稀释至刻度，摇: 试剂为空白，在选定波长处测定各浓度的吸光值，计算含量。 匀,放置15分钟，以相应 加标冋收率二（实验测得量-实验前样甜含量）十加入对照 品含量X 100%. 表3加样回收试验测左数据记录 分组吸光度「卅? =回收 率％平?回收RSD% 率％ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2. 3. 2精密度试验 精密量取供试品溶液5份，每份3inl,置25ml量瓶中，加水至6. Oml,加5%亚硝酸