乙肝基因检测及其临床意义.docVIP

乙型病毒性肝炎的基因检测及其临床意义 提要：目的：通过对乙肝基因检测的阐述及其与其他方法学的对比，凸显其在乙肝治疗的重 要性。方法：乙肝病毒基因定量检测及免疫胶体金法检测。结果：基因检测灵敏度高，可 判断病毒是否处于复制期，且H结果数值可肓接反应病毒复制状况。结论：乙肝基因检测对 乙肝患者的治疗有极其关键的指导作用。 关键字:HBV PCR HBV-DNA HBV感染人体后，可从血中测得抗原和 抗体类物质，称为血清标志物；同时，也可 测岀病毒的基因组核酸或其它相关核酸，如 HBV-DNA和HBV-DNAp,称为分子标志物；这 些标志物的存在和变化，反映病毒在宿主屮 的状态和病情的发展情况，是病毒性肝炎的 重要实验室诊断依据。 HBV是乙型肝炎、肝駛化和肝细胞癌的 主要致病因素。全球约20亿人为HBV易感 人群，3. 5亿为慢性HBV感染者，乙肝病毒 有8个基因型，其中中国有4个基因型。 关于乙肝病毒的介绍 1.1乙肝病毒的特点 HBV的基因变异性 HBV是极度变异的病毒Z-,变异是病 毒的特性，往往给临床诊断带來一定的困 难。 HBV的嗜肝性 HBV的一旦进入人体只侵袭肝脏。 1. 1.3 HBV的感染的慢性化 由于乙肝不能彻底的根治，长期下来多 转为慢性乙肝这个过程可达几卜年，所以它 是一个重要的传染源。 1. 1.4 HBV的致癌性 目前可以肯定HBV是诱发肝癌的重要病 因，有80-90%的肝癌患者有乙肝病史。 HBV具有顽强的抵抗力 能耐受低温、紫外线、干燥和一般消毒 剂。100C。10分钟高压蒸汽灭菌，0.5的过 氧乙酸等能使HBV灭活。 HBV具有严格的种属特点 HBV仅在人或黑猩猩身上生存。 1.2乙肝病毒的基因组成 HBV基因组为双链不完全环状DNA,由 3200个核廿酸组成，其负链包括四个开放读 框架区：1、S基因区，由5基因、前S2基 因(Pre-S2)和前S1基因(Pre-S 1)组成,分 别编码IIBsAg.前S2和前S1蛋H或抗原 (Pre-S2Ag 和 Pre-SlAg)。 2、C 基因区, 由前C基因和C基因组成，分别编码HBcAg 和HBcAgo 3、P基因区，编码乙型肝炎病 毒相关DNA聚合酶(DNAp)，其具有逆转录 酶活性。4、X基因区，编码乙肝病毒X抗 原，具有激活HBcAg基因的功能。 乙肝病毒检测及定量检测的临床意义 HBV-DNA是乙肝病毒的核心成分，是病 毒复制及有传染性的标志，是病毒感染的最 肓接、特异和灵敏指标。急性乙肝时， HBV-DXA阳性超过8周可变慢性。在慢性 感染时HBV-DNA可结合到肝细胞DNA屮， 称为整合型HBV-DNA ,如HBV病毒基因己 整合至宿主基因，治疗药物则难以到达，这 是HBV不易从体内清除的重要原因2 PCR法检测HBV-DNA,既可以定性，乂可以 定量，其临床应用有： 2.1病情评估 肝炎病毒在肝细胞内大量复制是导致 肝细胞免疫损伤的启动因素。血清HBV-DNA 含量高低与肝脏病理损害程度相关， HBV-DNA水平越高，肝组织炎症反应越重。 据此,通过定量检测HBV-DNA含量可以间接 评估慢性肝炎患者肝脏损伤的情况。 2. 2疗效观察 用抗病毒药物治疗慢性病毒性肝炎，治 疗前病毒基因水平愈高，疗效越差；水平愈 低，清除病毒可能性越大。相应地，在治疗 过程中，病毒基因水平下降愈快，完全治愈 的机会越大。因此可将肝炎病毒基因检测作 为预测和观察抗病毒疗效的一种手段。 2.3预后判断 ①治疗或未经治疗的慢性病毒性肝炎， 病毒基因水平保持稳定高浓度者预麻不良； ②垂冇传播途径感染肝炎病毒者，病毒基因 含量高，对各种抗病毒治疗的反应低，预后 养；③病程中，尽管反映肝细胞损害的其它 指标正常，但病毒基因水平经常波动者易发 展为肝硬化。 2.4药效验证：任何一种抗病毒药物对肝 脏的损害都是很大的。治疗后定量PCR可肓 接准确地测定体内病毒数最，有助于疗效的 判断，指导临床合理用药。 所以说HBV-DNA定量检测指标在乙肝治 疗屮冇着非常重要的意义，一般以定量检测 1. 0E3以下为阴性，以上为阳性。阳性提示 体内病毒复制活跃，血液屮含量高，传染性 较强；阴性则相反，病毒复制已得到抑制， 血液屮含量底，传染性弱。只有体内的 HBV-DNA定量指标降低，病毒的复制繁殖才 会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。 3. HBV的定量检测方法及其原理 3. 1 PCR的介绍 a Mullis 1983年发明聚合酶链反应 （PCR）这种核酸扩增技术以来，它已深入 到生命科学研究的每一个角落，且派生出了 备种各样的有其独特使用目的的核算扩增 检测技术。到20世纪90年代屮期，国内的临 床实验室将PCR技术广泛地用于HBV的临床 检测。 3.2 PCR技术的基本原理 类似于D