流感病毒分离鉴定-精选文档.ppt

? 目的：熟悉病毒血凝、血凝抑制试验的方法及其应用。 原理：流感病毒颗粒表面有血凝素 , 具有使鸡、豚鼠 等血细胞凝集的能力。把一定浓度的鸡红细胞加到待 检的鸡胚尿囊液或羊水中，如出现血细胞凝集现象， 即表示有病毒存在；如血凝阳性，则可进一步用血凝 抑制试验进行病毒鉴定，流感病毒的血凝性，可被免 疫血清中的特异性抗体所抑制，使其失去凝集作用， 借此可用已知抗体鉴定未知病毒及病毒的型、亚型。 ? ? 实验材料 ? (1) 接种流感病毒的鸡胚。 ? (2) 质量分数为 0 ． 5 ％的鸡红细胞悬液。 ? (3) 流感病毒型与亚型免疫血清。 ? (4) 碘酒，酒精消毒棉球。 ? (5) 灭菌的镊子、剪刀。 ? (6) 无菌小试管，毛细滴管，吸管。 ? (7) 生理盐水。 ? (8) 试管、试管架。 ? 实验方法： ? 1 、血细胞凝集实验 (1) 收获尿囊液：鸡胚孵育 3d 后 , 放 4 度冰箱过夜 , 次日 取出鸡胚 , 消毒气室端卵壳 , 用小镊子在无大血管处 撕破卵膜 , 以无菌毛细管吸取尿囊液 , 放入无菌试管 中。 (2) 取尿囊液 0 ． 1mL, 作 1 ： 10 稀释。 (3) 取 10 支小试管，按给各管加入生理盐水 0.2mL 。 (4) 取 1 ： 10 稀释的尿囊液 0 ． 2mL ，加人第 1 个试管 中，混匀后，再吸出 0 ． 2mL 加入第 2 个试管中； 混匀后，从第 2 个试管吸出 0 ． 2mL 加入第 3 个试 管 …… 依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第 9 个试管中取出 0 ． 2mL 弃掉。这样各管液体量均 为 0 ． 2mL ，从第 1-9 个试管的尿囊液稀释度为 1:20 ， 1:40 ， … ， 1:5120 ，第 10 个试管为生理 盐水对照管。 (5) 稀释完毕后加人体积分数为 0 ． 5 ％的压积鸡红 细胞悬液，每管 0 ． 2mL, 室温放置 30~60mn 。 流感病毒血凝试验 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃 0.2 病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对 照 0.5% 鸡红细胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 摇匀置室温 60 ～ 90 分钟 结 果 ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++ + － － － → → → → → → → → → ㈠ ㈡ ㈢ ㈣ ㈤ ㈥ ㈦ ㈧ ㈨ ㈩ 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃 0.2 病毒稀释度 1:20 1:40 1:80