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一 . 概述 ( 一 ) 发展历史 ? 1971 年 Faulk 和 Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶 体金颗粒结合 , 制备成金标抗体 , 检测细菌表面抗原的 分布 ? 1975 年 Horisberger 等 把胶体金技术推广应用于扫 描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究 ? 1978 年 Geoghegan 发表了胶体金标记物在光镜 水平的应用 ? 1981 年 Danscher 建立了银显影液增强，光镜 下金颗粒可见性的方法 ? 1983 年 Moeremans 等 在蛋白质转移电泳中应用 了免疫金银染色法 ? 1986 年 Fritz 等 在免疫金银法基础上成功进行了 彩色免疫金银染色 免疫胶体金技术 以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研 究中，对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋 白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大 分子进行定位研究 （二）胶体金的基本概念 胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。 --- 金以微小的粒子分散在水中所形成的金 溶胶。其中分散的金颗粒直径在 1~100nm 之间。 二 . 胶体金的制备 ( 一 ) 可用多种方法制备胶体金 1. 分散法 : 包括机械分散法、超声波法、电分 散法和胶溶法等 2. 凝聚法 : 包括物理凝聚法、化学凝聚法（氧 化法、水解法和还原法） 3. 其中应用最多的是 化学还原法 化学还原法 【基本原理】 在氯化金水溶液中加入一定量的还 原剂，使金离子还原为金原子。在适当条件下， 还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒，形成 金溶胶。 【常用还原剂】 柠檬酸钠、鞣酸、白磷等 柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大， 15~150nm 白磷还原制备的金颗粒直径较小， 3~12nm 【具体制备方法】 （二）影响溶胶稳定性的因素 ? 电解质 ? 胶体金浓度 ? 温度 ? 大分子物质 （三）胶体金的鉴定 【鉴定方法】 在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度 【鉴定方法】 将胶体金滴在覆有 Formvar 膜或碳 - Formvar 膜的镍网上，空气干燥， 透射电镜下观察，拍照，测量金颗粒的 直径，并计算 100 个以上胶体金颗粒直径 的平均值及标准差 （四）制备胶体金的注意事项 1. 玻璃器皿的清洁 玻璃器皿清洗 → 清洁液浸泡 24h → 流水冲 → 蒸馏 水反复洗涤 → 晾干 应尽量使用分析纯试剂 2. 试剂配制 3. 影响胶体金颗粒大小的因素 加入还原剂的速度 搅拌是否均匀 各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制 制备胶体金所用的烧瓶大小 三 . 胶体金探针的制备 ( 一 ) 胶体金与蛋白质结合的原理 胶体金标记蛋白质的过程 , 实际上是蛋白质在等电 点或稍偏碱时 , 被吸附于胶体金颗粒表面 . （二）胶体金的预处理 标记之前将胶体金的 PH 值调至待标蛋白质 的等电点或略偏碱 调节 PH 的方法： 当需要提高胶体金的 PH 值时，用 0.2mol/L K2CO3 或 0.1mol/L KOH 当需要降低胶体金的 PH 值时 , 用 0.1M HCL 或醋酸 ( 三 ) 待标记蛋白质的处理 1. 透析除盐 : 将蛋白质溶液装入透析袋中 , 放 在蒸馏水中透析 , 4 ℃过夜 2. 离心 : 10000 r/min, 4 ℃ , 1h, 去除蛋白质聚 合物等沉淀 ( 四 ) 胶体金蛋白质最佳结合率测定 不同直径的金颗粒 , 及不同分子量大小的 蛋白质 , 其结合的比例是不同的 常用的检测二者结合量的方法有 目测法 和 光 电比色法 1. 目测法 ? 先将待标记蛋白质逐级稀释 ? 取一批小试管，编号，每管内加已调好 PH 的胶 体金 100ul ? 按从低 → 高的浓度，将已稀释好的蛋白溶液， 分别加入已编号的试管中，对照管只加不含蛋白 的稀释液，混匀，静置 5 ~ 10 min ? 各管分别加 10