【国自然】非人灵长类克隆及治疗性克隆的机理研究.docxVIP

项目称号： 非人灵长类克隆及医治性克隆的机理研讨 首席科学家： 周琪 中国科学院动物研讨所 起止年限： 2006.1至2010.12 依托部分： 中国科学院 一、研讨内容 深化了解在灵长类体细胞克隆胚分解与去分解进程中基因与蛋白表达、转录调控及信号传导的分子机理是本项目拟处理的要害科学问题。本项意图研讨要点包含： 完善动物克隆技能，测验树立具有自主知识产权的无性繁殖技能 以改善核移植流程，进步克隆功率为主，讨论树立非细胞体系的无性繁殖技能的或许性。2．体细胞的去分解探究和发现卵母细胞中与体细胞去分解相关的要害蛋白、化学物质。关于发动重编程相关的要害蛋白和化学物质进行深化研讨，规划调控基因表达的首要成分表，操控发育进程。3．保持胚胎干细胞多能性的机制研讨Nanog、Oct4等转录因子的各个结构域在行使功用时发挥的效果; 以胚胎干细胞未分解的标志性转录因子Oct4及Nanog为中心，研讨由其调控的下流基因及其相互联系。4．胚胎的发育研讨细胞核在细胞质环境中的三维结构改变，找到细胞核重编程的结构根底，研讨分解是怎么发生的及基因的动态表达进程，找出决议分解的基因网络。 详细答复的问题包含： 树立有用、经济的灵长类动物核移植办法，处理核移植功率低下的问题。 灵长类克隆胚在重编程进程中卵母细胞质因子的效果，找到参加体细胞核移植后重编程进程的要害蛋白质并说明其在这一进程中所起的效果。 表观遗传润饰印记的消除对灵长类动物克隆胚发育的影响。 在胚胎干细胞保持其多能性的进程中，重要转录因子的调控机制。 胚胎干细胞向神经干细胞发育进程中的信号通路和基因调控。 提醒灵长类基因组的差次表达形式和中枢神经体系发育的分子根底。 首要研讨内容： 对灵长类动物卵及前期胚胎生化特性及基因组表观遗传润饰进行研讨；灵长类动物种间核移植研讨；挑选、制备灵长类动物核供体细胞；树立有用、经济的灵长类动物核移植办法。 克隆灵长类动物；从克隆胚胎中别离胚胎干细胞并建系。 在胚胎基因组激活进程中，比较正常胚胎和核移植胚胎基因表达谱的差异；剖析差异表达基因在核内的定位；别离在胚胎前期发育进程中起重要效果的新的转录因子；研讨受精卵和克隆胚在着床前胚胎发育进程中基因的表达和调控。 研讨表观遗传润饰印记的消除对灵长类动物克隆胚发育的影响。 研讨Nanog、Oct4等转录因子的各个结构域在行使功用时发挥的效果; 以胚胎干细胞未分解的标志性转录因子Oct4及Nanog为中心，研讨由其调控的下流100个基因及其相互联系；Oct4、Nanog调控基因表达的试验研讨; Oct4,Nanog在胚胎干细胞中的表达调控研讨。 选用蛋白质组学技能研讨老练卵母细胞、激活卵母细胞、受精卵的蛋白质表达谱，用生物信息学办法构建相关蛋白质组学数据库，并经过比较这些蛋白，或许蛋白磷酸化等差异，取得其间参加细胞由分解转为未分解的程中起要害效果的蛋白质，并对其蛋白表达，翻译后润饰和功用进行进一步研讨。 研讨在HGF和bFGF条件下，胚胎干细胞向神经干细胞分解的基因表达差异和HGF和bFGF引起的相应受体磷酸化。要点为HGF和bFGF与其受体结合后引起哪些位点的酪氨酸残基发生了磷酸化，以及不同浓度的HGF和bFGF引起磷酸化的强弱。 研讨导致神经干细胞分解的信号通路。包含：HGF和bFGF引起的相应受体磷酸化的信号通路，要点研讨Ras，ERK，MAPK，PI3 kinase，PLC-γ，STAT3，Src，RhoA-ROCK等通路对神经干细胞分解的影响；脂筏（lipid rafts）在HGF和bFGF存在的条件下，对神经干细胞分解的影响。Notch和Wnt信号通路，对神经干细胞的分解的效果。 选用DNA芯片技能对恒河猴（Macaca mulatta）正常胚和体细胞克隆胚不同发育时期（从囊胚期、原肠胚、神经胚到大脑构成）的基因表达形式进行剖析，寻觅在神经体系发育进程中特征性表达的基因和基因宗族；隔阂，比较人和恒河猴胚胎干细胞诱导分解为神经样细胞前后基因表达图谱的差异，提醒参加神经体系分解的基因和基因宗族。 二、预期方针 整体方针:使用核移植手法取得体细胞克隆恒河猴，提醒动物克隆和医治性克隆研讨中的细胞去分解和分解的分子机制。五年预期方针: 树立高效的灵长类核移植办法，克隆恒河猴；从克隆胚胎中别离ES细胞系； 提醒Nanog、Oct4等多能性转录因子的结构根底及在蛋白水平上的调控机制；并确认和克隆它们的下流因子，讨论其效果机制； 取得诱导体细胞重编程的要害蛋白并说明其效果机制； 发现恒河猴体细胞核移植后前期胚胎发育进程中表达的重要基因及其功用和效果办法；研讨遗传印记对克隆胚发育的影响； 了解恒河猴胚胎干细胞向神经干细胞分解的首要信号途径； 挑选在神经体系发育进程中特征性表达的基因和基因宗族； 培育研