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荧光定量 PCR 原理及常见问题分析 学习汇报 汇报人：郭荣荣 荧光定量 PCR 原理 PCR 动力学曲线：四个阶段 基线期 指数增长期 线性增长期 平台期 基线期 指数增长期 线性增长期 平台期 荧光定量 PCR 原理中的基本概念 1. 基线：扩增曲线的水平部分 基线的背景信号：模块、试剂、耗材。 2. 阈值：设定的一个荧光强度值，穿过阈值 与 X 周平行的直线为阈值线。 设置阈值的标准： a. 高于基线 b. 位于指数增长期，且位于重复性较高的 区域 3.Ct ：阈值线与扩增曲线的交点对应在 X 轴的 数值。（ 与起始浓度的对数成线性关系 ） 阈值线 Ct 值 常见问题 ? 一、存在抑制物 ? 二、重复性差 ? 三、可疑扩增曲线 常见问题一 存在抑制物 1 、扩增曲线斜率不一致，提示存在抑制物 抑制物：黑色素（头发）、多糖类（ DNA ）、血红蛋白（血液）、尿素； 乙醇、蛋白酶 K 、胍盐、苯酚。 2 、检查样本质量 a. 用分光光度计检测样本 260/280 比值 eg ： DNA 纯度： OD