8底物浓度对酶浓度的影响.docVIP

第五节 酶促反应动力学 一切有关酶活性研究，均以测定酶反应的速率为依据。酶反应速率受很多因素的影响。这些因素主要有底物浓度、酶浓度、pH、温度、激活剂和抑制剂等。当研究某一因素对酶反应速率的影响时，必须使酶反应体系中的其他因素维持不变，而单独变动所要研究的因素。酶反应速率是指酶促反应开始时的速率，简称初速。因为只有初速才与酶浓度成正比，而且反应产物及其他因素对酶促反应速率的影响也最小。研究影响酶促反应速率的各种因素，对阐明酶作用的机理和建立酶的定量方法都是重要的。 研究前提 必须是单底物、单产物反应；酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示；反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度；底物浓度远远大于酶浓度。 一、底物浓度对酶反应速率的影响 1.在酶促反应中，因其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响 呈矩形双曲线关系。该曲线表明，当底物浓度较低时，反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。随着底物浓度的增高，反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。当底物浓度高达一定程度，反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应。 可以通过米氏方程来进行推算底物对酶的最大反应速率 什么是米氏方程式？1913年Michaelis和Menten在快速平衡理论的基础上提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即著名的米-曼氏方程，简称米氏方程式(Michaelis equation) 式中：[S]：底物浓度，V ：反应速度，Vmax：最大反应速度，Ｋm：米氏常数 对Km值得推倒可以得知，米氏常数就是酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，它的单位与底物浓度一样，是mol/L。 (2) Km的意义 Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 (3) Vmax的意义 定义：Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成 正比。 意义：Vmax=K3 [E] 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算的转换数，即动力学常数K3。即单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 3.米氏常数Km的测定 对于米氏常数的测定可通过双倒数作图法，来进行测定。从图中可得知1比反应速度对1比底物浓度作图是一条直线，其斜率是米氏常数比反应的最大速率，在纵轴上的截距为1比反应的最大速率，横轴上的截距为-1比米氏常数。此图除用来求米氏常数和反应的最大速率值外，在研究酶的抑制作用方面，还具有重要价值。 关于米氏常数Km的几点说明： a.不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数,只与酶的性质有关，而与其浓度无关。 b.Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。 C. 同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。一般情况下，1/Km可以近似地表示酶对底物的亲和力大小， 1/Km愈大，表明亲和力愈大。 d.催化可逆反应的酶，推测正逆反应的效率。 e.有助于寻找连锁反应的限速步骤。