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原因：壳聚糖自身具备高聚物的结构特征,分子量越大其聚合度越大,越有利于与聚阴离子形成聚合物交联网络, 能被这种聚合物交联网络包裹进去的 BSA 的量也越多. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 因此, 综合考虑包封率和颗粒大小, 我们选择分子量为 400 kDa的壳聚糖作为药物的合适载体. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 近几年来, 随着纳米技术的飞速发展,将纳米颗粒的制备技术引入壳聚糖-蛋白质药物载体的应用领域逐渐成为人们的研究热点. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 壳聚糖( chitosan)是甲壳素脱乙酰化的产物,是地球上仅次于纤维素的最为丰富的天然高分子化合物, 其化学名称为聚 2-氨基- 2-脱氧-β- 葡萄糖,是由N -乙酰氨基葡萄糖以 α-1, 4糖苷键缩合而成, 是一种天然聚阳离子碱性多糖. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 壳聚糖是一种用途很广的天然高分子化合物, 具有无毒、 生物相容性、 吸附功能、 生物可降解性及多种生物学活性等优异性能. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 本文思路： 采用基于壳聚糖(CS)与聚阴离子(多聚磷酸纳)间静电作用的离子凝胶化方法,以牛血清白蛋白(BSA)为模型,在室温下制备了包载蛋白质的亲水性壳聚糖纳米颗粒.对BSA-壳聚糖纳米颗粒的形成条件进行了考察,结果表明:在pH 值为5. 0, CS 与TPP的质量比为4,壳聚糖分子量为400kDa的最优化的条件下可制备粒径小于100 nm的BSA-壳聚糖纳米颗粒,对BSA的包封率达到50%以上.并将该体系初步应用于蛋白类药物丙种球蛋白-壳聚糖纳米颗粒的制备研究, 这种壳聚糖纳米颗粒对丙种球蛋白具有良好的缓释作用. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 1、实验部分 1.1 试剂及仪器 壳聚糖, Fluka 公司; BCA 蛋白质试剂盒, 美国Pierce公司; 牛血清白蛋白, 上海伯奥科技有限公司; 丙种球蛋白, 南京军区生物制品药物研究所; 其他试剂均为国产分析纯. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 SPA-400 原子力显微镜, 日本精工公司; 3000HS 激光粒度分析仪, 英国 Malvern 公 司; CR22G 高速冷冻离心机,日本日立公司. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 1.2 实验方法 1.2.1 BSA壳聚糖纳米颗粒的制备及影响 因素的考察 先将壳聚糖溶解到HAC-NaAC缓冲溶液中,在磁力搅拌下,将一定体积溶有BSA 的TPP 溶液滴加到壳聚糖溶液中,室温下反应3 h 后即可. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 改变缓冲溶液的pH值、 CS 及TPP的质量比以及选用不同分子量的壳聚糖制备BSA-壳聚糖纳米颗粒( CS-BSA-TPP) ,在激光粒度分析仪上测定不同条件下颗粒的平均粒径,分别考察上述条件对纳米颗粒粒径的影响. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 1.2.2 BSA-壳聚糖纳米颗粒的表征 根据粒径的最佳条件制备CS-BSA-T PP 纳米颗粒,取适量产品溶液滴于云母片上, 自然干燥后通过原子力显微镜观测纳米颗 粒的直观形貌图. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 1.2.3 BSA 包封率的测定 按上述最佳条件制备CS-BSA-T PP 纳米颗粒及未包载 BSA 的空白纳米颗粒( CS-TPP) , 取适量产品溶液在10℃下超速离心( 26 000 r/ min) 30 min,量取适量上清液,按照BCA 蛋白质试剂盒提供的方法绘制标准曲线. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 测定上清液中 BSA 的浓度,根据下列公式求出BSA 的包封率: A . E. %= [ ( m - m1) / m] 100%. 式中: m 为BSA 总量; m1 为上清液中BSA 的含量. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 2、结果与讨论 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 2.1 CS与TPP 质量比对颗粒粒径的影响 改变CS 与TPP 的质量比(mcs/mTPP) ,分别测定不同条件下 CS-BSA-TPP 纳米颗粒的粒径, 当mcs/mTPP值在3~ 8 之间时, 颗粒的平均粒径处于80~ 250 nm之间, 其中以 mcs/mTPP为 4：1时粒径最小; 而mcs/mTPP值低于 3 及高于 10 以后, 得到的是微米颗粒. 基于壳聚糖载体的蛋白质药物纳米 基于壳聚糖载体的