现代光学分析：第5章 化学发光分析法.pptVIP

鲁米诺衍生物的化学发光简单机理 K3Fe(CN)6氧化鲁米诺化学发光反应机理 K3Fe(CN)6氧化鲁米诺化学发光反应机理 快反应 K3Fe(CN)6氧化鲁米诺化学发光反应机理 HRP与过氧化氢反应生成一氧化HRP(HRPⅠ),它 同鲁米诺阴离子反应生成半还原酶(HRPⅡ)和鲁米诺自 由基.再与第二个分子鲁米诺反应,酶回到还原形式. 辣根过氧化物酶催化反应机理 鲁米诺- 鲁米诺* 鲁米诺- 鲁米诺* ②.丫啶衍生物 丫啶衍生物的一般发光机理 ③.过氧草酸盐类 过氧草酸盐类化学发光机理 草酸酯类化学发光机理分为三步:①.过氧化氢对草酸 酯的羰基亲核进攻,生成能产生高能量的双氧基环状中间 体二氧杂环丁二酮; 分解 H2O2 过氧草酸盐类化学发光机理 ②.中间体分解,将能量传递给受体荧光分子,使之处于 激发态;③.这种激发态分子从激发单重态回到基态,释 放出光子即发出荧光. 分解 FL FL*+H2O2 FL* FL + hv 过氧草酸盐类的代表化合物(7)-双[2,4-二硝基苯基]草酸盐(DNPO)和(8)-[2,4,6-三氯苯基]草酸盐TCPO发光效率可达27% 过氧草酸盐类的应用 ②.待测物质参与某一反应可产生H2O2 等氧化剂而间接被测定. ①.待测物质本身是荧光剂,可作为能量接受体和发光体. ③.待测物质可被衍生成荧光物质. ④.二氧杂环丁烷类 ⑤.贵金属络合物发光试剂 贵金属络合物发光试剂的发光动力学曲线 贵金属络合物发光机理 贵金属络合物发光机理 化学发光分析法的应用 ①.无机物的分析 ②.有机物和药物分析 ③.生物体内活性氧的化学发光研究 ④.化学发光在核酸杂交分析中的应用 化学发光与荧光的异同点是什么? 第5章 化学发光分析法 澳大利亚奇湖夜间发出幽蓝色荧光 幽蓝荧光原来是湖中微生物被外界干扰后出现的“应激反应” 这种荧光是由一种被称为“生物体发光”(bioluminescence) 的化学反应引起的，一旦生活在湖水中的微生物夜光藻(Noctiluca Scintillans)受到外界“干扰”，它们就会做出自然反应，发出亮光。 化学发光定义 定义: 由化学反应产生能量,吸收了化学反应能的原子或分子 由激发态回到基态时产生的这一光辐射现象叫化学发光. 化学发光简史 公元前300年,人们观察到天然的生物发光. 1877年,Redziszewski 首次报道洛吩碱(Lophine,2,4,5-三苯基咪 唑)在碱性介质中与氧反应发出金黄色的光--人为的化学发光. 1928年,Albrecht报道了鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质 中的化学发光行为. 1929年,Harvey在电解碱性鲁米诺发现电极附近有发光现象,即 文献记载的最早的电致化学发光. 1935年,Gleu和Petsch第一个报道了光泽精(Lucigenin,N,N-二甲 基二丫啶硝酸盐)与过氧化氢反应产生的化学发光-绿光. 1964年,Mccapra提出基于一个二噁烷酮环形成机理来解释丫啶 酯的化学发光. 1966年,Lytle和 Hercules发现在强酸性或强碱性的钌(Ⅱ) [Ru(bipy)32+]溶液中加入芳香胺时发出橘红色的光(595nm). 荧光 磷光 化学激发 1.化学法应能(Φc) 150-300kJ/mol 2.能量转移(Φc) 碰撞去活化 光激发 化学发光及其光物理过程 ①.该反应必须提供足够的激发能(对于蓝光发射约需300kJ●mol-1,红光发射约需150 kJ●mol-1).导致电子从基态跃迁至激发态,这一电子跃迁常常伴随有分子的振动和转动变化. 化学发光反应的基本条件 ②.在多步骤反应中,由于化学激发的瞬时性,这个能量必 须由某一步单独提供,否则前一步反应释放的能量将因 振动弛豫消失在溶液中而不能发光. 大部分有机物具有化学发光性能,但量子产率一般 很低,远小于1%,且多数具有氧化还原性能.因此,化学反 应的能量至少能被一种物质所接收并使之生成激发态. 对有机分子来说,从能量上来看,容易生成激发态产物的 常是芳香族化合物和羰基化合物. ③.处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光 量子效率使其能释放出光子,或者能够转移它的能量给 另一个分子使之处于激发态,在从激发态回到基态的过 程中释放出光子. 化学发光量子效率 ?c是具有可能产生激发分子的反应分子分数即形成化 学产物的量。 ?e是处于电子激发态分子的分数,与能量转移效率有关。 ?f是发射出光子的分子占从激发态回到基态的分子的 分数。