分子生物学学习课件：第三部分 DNA的生物合成.pptVIP

错配修复(mismatch repair) 是指在含有错配碱基的DNA分子中，使正常核苷酸序列恢复的修复方式。需要区分母链和子链（通常依赖甲基化修饰）。修复的过程是：识别出正确的链，切除掉不正确的部分，然后通过DNA聚合酶III和DNA连接酶的作用，合成正确配对的双链DNA。 * 修复对象：将DNA中因紫外线照射而形成的嘧啶二聚体分解。 机制：细胞内光裂合酶(photolyases)分子中生色基团次甲四氢叶酸吸收光子并将FADH2激活生成的激发型FADH2，再将电子转移给嘧啶二聚体，使其还原。 分布：分布广泛，除哺乳动物外均有之。 （一）直接修复(direct repair)利用修复酶简单地逆转DNA损伤 1.光复活修复系统 * TT最多 修复对象：DNA中被甲基化修饰的鸟嘌呤（O6-甲基鸟嘌呤，与T配对）。 机制：将甲基转移到酶蛋白活性中心的Cys残基侧链上，使鸟嘌呤复原，避免发生突变。 特点：DNA甲基转移酶一旦接受甲基就不再具有催化活性 ，修复代价高昂 。 2.O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶修复 * 先利用糖苷酶识别、切除受损碱基，产生AP位点；然后分别由AP内切酶、AP外切酶在AP位点的5’和 3’端切割磷酸二酯键，产生缺口。DNA聚合酶填补产生的缺口。最后DNA连接酶连接，完成修复。 （二）碱基切除修复直接切除受损碱基 碱基切除修复（base excision repair, BER）（较普遍） 对象：受损的碱基 修复系统： * 胞嘧啶脱氨基产生的尿嘧啶； 氧化的鸟嘌呤（oxoG）； 脱氨基的腺嘌呤； 开环碱基； 碳原子之间双键变成单键的碱基等。 DNA糖苷酶（具损伤特异性）识别的异常碱基包括： * 是一种受损碱基在DNA复制之前没有通过碱基切除的补救机制。由于G的氧化而产生的oxoG与A配对时，会有特异的糖苷酶识别并除去未受损的A。同样，在T与G配对中，糖苷酶会认为T是5-甲基胞嘧啶脱氨基产生的而除去T，使其被C取代。 自动防故障（fail-safe）系统 * DNA聚合酶和连接酶以未损伤的DNA链为模板修补缺口。 （三）核苷酸切除修复系统识别DNA双螺旋变形 核苷酸切除修复(nucleotide excision repair, NER)并不识别任何特殊的碱基损伤，而是系统识别DNA双螺旋形状的变形，并加以切除。 * 病症：着色性干皮病 UvrA识别DNA双螺旋结构变形 UvrB负责解链，募集核酸内切酶UvrC UvrC在损伤部位的两侧切断DNA链 UvrD去除这两个切点之间的DNA片段（DNA解旋酶） DNA聚合酶Ⅰ和连接酶（需要ATP）填补缺口 E.coli的NER主要由4种蛋白质组成： * NER不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复（transcription-coupled repair）。 作用方式：NER蛋白质被募集于暂停的RNA聚合酶（起到了一种损伤传感蛋白的作用）。 转录偶联修复的意义：将修复酶集中于正在转录DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。 * 1. 在核苷酸切除修复（包括转录偶联修复）时起DNA解旋酶的作用； 2. 在转录过程中打开DNA模板。 真核转录偶联修复的核心是TFⅡH。 TFⅡH分别参与两个独立过程： 原核细胞也存在转录偶联修复。 * 对于DNA双链断裂（double-strand break，DSB）损伤，细胞采用双链断裂修复，即重组修复（recombinational repair），通过与姐妹染色体正常拷贝的同源重组来恢复正确的遗传信息。 （四）重组修复系统能够修复双链断裂损伤 * * 损伤部位仍然存在，在可以产生一条没有损伤部位的DNA链，随着复制代数的增加，有损伤部位的DNA所占的比例越来越少。 RecBCD酶复合物有解旋酶和核酸酶活性。 RecA起关键作用 重组修复作用机制： E.coli的rec基因（recA、recB、recC和recD）编码的几种酶参与重组修复。 * 正在复制的DNA聚合酶可能遭遇尚未修复的DNA损伤，细胞自动防故障系统能够使复制体绕过损伤部位，这一机制就是跨损伤DNA合成。 E.coli跨损伤DNA合成由UmuC-UmuD′复合物进行。 特点：差错率高，是最后的手段，是SOS应答的一部分。 （五）跨损伤DNA聚合酶能够跨越损伤部位合成DNA * 三、DNA损伤修复具有重要的生物学意义 修复系统的存在保证了物种遗传的稳定性，对降低修复缺陷相关疾病的发病率有十分重要的意义。 * 前导链：出现在引发后期 后随链：发生于每个冈崎片段合成之际 （2条链的合成起始机制类似：Polα/引发酶产生RNA-DNA引物，一旦合成，RFC识别其iDNA的3’端并驱逐Polα/引发酶，然后PCNA结