生物化学：第4章 DNA的生物合成.pptxVIP

第四章 DNA的生物合成;第二节 DNA复制的反应体系;核苷酸与核苷酸之间生成磷酸二酯键是复制的基本化学反应;一、DNA聚合酶;;（一）原核生物有3种DNA聚合酶;２个核心酶 1个?-复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 1对?-亚基（可滑动的DNA夹子）;DNA-pol Ⅰ（109kD）;323个氨基酸; “在老孔伯格获奖十年之后，人们才知道，他所发现的DNA聚合酶并非细菌真正用于复制DNA的酶，在细胞内执行这个任务的是另一种新发现的酶——DNA聚合酶III。老孔伯格的酶（被命名为DNA聚合酶I）只是在DNA复制中起修补作用（不过，这种酶后来在分子生物学研究和遗传工程中发挥了巨大的作用）。值得老孔伯格欣慰的是，新的酶是他的二儿子托马斯·孔伯格在哥伦比亚大学读书时发现的。托马斯现在是加州大学旧金山分校的生物化学教授。 ”（方舟子博客：上阵父子兵） 这一家人共发现了30多种酶。 老孔伯格1975年写了一本书 “For the love of enzymes” （酶的情人）;DNA-polⅠ的主要功能： 去除引物，填补引物消除后的空隙； 对复制中的错误进行校读，填补修复中出现的空隙。;DNA-pol Ⅱ（120kD）;（二）常见的真核细胞DNA聚合酶有5种;增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。;DNA聚合酶共同特点;DNA聚合酶对碱基的识别及选择 和校对功能实现复制的保真性;;1. 解螺旋酶（helicase）;;拓扑异构酶Ⅰ;3. 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB);引物（primer）;四、DNA连接酶(DNA ligase);DNA连接酶(DNA ligase);;小结：DNA复制的反应体系;第三节 DNA复制过程 The Process of DNA Replication in;E. Coli 基因图;E.coli复制起始点 oriC;;;;;;领头链的合成：;; 在复制叉同时合成前导链和后随链;;复制过程简图;切除引物 5′→3 ′外切酶活性;;为什么一定要引物？;;多个复制起始点，冈崎片段短，复制叉前进速度慢 复制子（replicon）：两个复制起始点之间构成 DNA复??与核小体装配同步进行;Pol ?/引发酶 合成RNA-DNA引物 Pol ? 合成前导链和后随链 RFC 识别引物iDNA的3?端并驱除Pol ?/引发酶 PCNA 结合DNA并引入Pol ? RNAse H I/FEN1 切除冈崎片段5?端的RNA引物 Pol ?（或Pol ?） 填补冈崎片段之间的空隙 DNA连接酶Ⅰ 封口 RPA 稳定解旋后的单链DNA 解旋酶 复制叉的形成和移动必不可少 拓扑异构酶 释放复制叉前进时产生的扭曲应力;Comparison of Prokaryotic and Eukaryotic DNA Polymerases;;前导链产生完整的子染色单体。 后随链3?端留下缩短的未复制的ssDNA区。;;端粒（telomere）;端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白质组成。 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 功能： 端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3?端ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体的3?端。这些新合成的DNA为单链。;端粒酶催化作用的爬行模型 ;DNA聚合酶复制子链;端 粒;端粒酶与细胞寿命;基因突变（gene mutation）;一、引发突变的因素;化学因素;突变的意义;二、基因突变类型;谷 酪 蛋 丝; 光复活修复：400nm左右的光激活光复活酶，专一分解紫外光照射引