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项目十一、使用分光光度计-绘制工作曲线及测定微量铁 项目十一、使用分光光度计-绘制工作曲线及测定微量铁 项目十一、使用分光光度计-绘制工作曲线及测定微量铁 项目十一、使用分光光度计－绘制工作曲线及测定微量铁 【概 述】 工作曲线法是当前实际生产中经常使用的一种定量剖析方法，特别 是在分光光度法的定量剖析中，由于其操作方便、简单实用、对仪器的 要求不高、测定结果正确度较高而成为最常用的剖析方法。因此，它是 操作和使用分光光度计从事定量剖析的工作人员必须掌握的一项专业 技术。经过此专项能力的培养，能使你熟悉和掌握工作曲线的绘制方法 以及样品剖析的各项步骤。 【学习途径】 〖知识部分〗 １. 单组分定量剖析的三种基本方法 . 工作曲线法进行定量剖析的基来源理及方法〖能力部分〗 １. 分光光度计的结构及使用方法 . 正确配制铁标准溶液 ３. 正确绘制工作曲线 【评论标准】 2h 内达成配制标准系列显色溶液， 分别测定其吸光度， 绘制工作曲 线，测定样品中微量铁含量。 【评定方法】 〖应知自测〗 当您经过学习后，应能娴熟掌握本专项能力所需的知识要求， 并能正确达成学习包中的自测题（也可根据指导教师要求进行测试）。 〖应会测试〗（操作查核） 在您参加考试之前，应先检查自己是否达成了下列学习任务： 复习与本专项能力有关的模块。 学习并掌握本专项能力所需的知识，并经过自测。 能娴熟使用本专项能力所需的仪器、试剂、设施，并能达成规定的测试任务。 您认为已能达到本专项能力的培训要求， 即可参加专项能力的技术操作查核，查核成绩由监考教师认定。 【工作曲线的意义和作用】 当我们用分光光度法对某个样品进行定量测准时， 工作曲线法往常 是人们的首选方法。 首先我们要配制几个已知浓度的标准系列样品 （与待测样品相同的物质），并在选定的温度、 波长、溶剂、显色剂等条件下测定其吸光度，进而就能够得到若干组浓度与吸光度相对应的数据。 将这若干组数据在坐标纸上作图 （一般总是以浓度为横坐标， 以吸光度为纵坐标），我们就得到了一条曲线。这条曲线所反应的就是浓度 与吸光度的对应关系。很显然，这条曲线上有无数个点，每一个点都对应一组数据。 关于需要测定的未知样品来说， 只需在等同的条件下测得其吸光度，我们就能利用这条曲线快速而正确地计算出待测样品的浓度或含量。因此，人们就将这条曲线称为工作曲线。工作曲线法不只在分光光度法的定量剖析中使用， 而且在容量剖析及其余种类的仪器剖析中也有十分宽泛的应用。 【工作曲线的绘制方法】 工作曲线的制作方法如下： 按产品标准的规定配制 4 个以上浓度成 适合比率的待测组分标准溶液，以空白溶液为参比溶液 （必要时可采用 溶剂作为参比溶液进行测定，同时用空白溶液的吸光度进行校正），在 选定的波长下，分别测定吸光度。以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为 纵坐标，在坐标纸上绘制工作曲线 ( 图样可参赐教材 3.5.1.1) ，并注明 标准溶液（或标准试样） 名称、浓度（或含量）、吸光度、测量条件（仪 器型号、波长、吸收池光程长度、参比液）。 【配置标准系列显色溶液的方法】 绘制工作曲线的第一步工作就是配置标准系列显色溶液。由朗伯 - 比尔定律可知，溶液吸光度的大小与溶液中吸光物质的含量（或浓度） 呈线性正比关系， 因此从理论上讲，由标准系列显色溶液所得的工作曲线，应是一条圆滑的直线。而实际工作中这条工作曲线是否为理想的直线，与很多因素有关，合理地配置标准系列显色溶液是十分重要的重点性步骤。 往常，我们首先要根据待测样品的种类和特性，确定剖析方法以及波长、温度、显色剂、 pH值平剖析条件 （上述这些剖析条件在产品标准中都有明确规定， 可直接查阅） 。按产品标准的规定配置 4 个以上浓度成适合比率的待测组份标准溶液， 并在其中加入等量的显色剂、缓冲剂等协助试剂，这样就达成了标准系列显色溶液的配置。 比如，在测定铁含量的剖析中，我们是这样进行操作的： -1 １. 用吸量管分别吸取 ρ 的铁标准溶液： 、 、 . 在上述容量瓶中各加入 2.5mL10g.L -1 的盐酸羟胺水溶液（新配），摇匀。再加入 5mLHAc－NaAc缓冲溶液（）和-1 邻二氮菲，用蒸馏水稀释至标线，摇匀，放置 10 分钟。 这样就达成了标准系列显色溶液的配制。 【单组分定量剖析的主要方法】 一、工作曲线法 这是工厂剖析中应用最多的定量方法。工作曲线的制作方法如下：按产品标准的规定配制 4 个以上浓度成适合比率的待测组分标准溶液，以空白溶液为参比溶液（必要时可采用溶剂作为参比溶液进行测定，同 时用空白溶液的吸光度进行校正） ，在选定的波长下， 分别测定吸光度。以标准溶液浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标， 在坐标纸上绘制工作曲线，并注明标准溶液（或标准试样）名称、浓度（或含量）、吸光度