卫生化学：第五章 分子荧光分析法.pptVIP

1.光源 在紫外到可见区可供荧光激发用的光源主 要有汞灯、氙灯、卤钨灯、激光器等。 汞灯、卤钨灯常用于荧光灯，氙灯用于 荧光分光光度计。 2.分光系统（具有两个单色器） 荧光计用滤光片作为色散元件。 荧光分光光度计采用光栅作为色散元件。 3. 样品池 通常用石英制成 4. 检测器 光电倍增管 二、仪器类型 1. 荧光计 用滤光片作单色器（激发滤光片和荧光滤光片），溴钨灯或高压汞灯作光源，光电管为检测器。 2. 荧光分光光度计 用氙灯作光源、光栅作单色器，光电倍增管为检测器。可连续扫描激发光谱和荧光光谱。 第三节 定性定量分析 一、定性分析 荧光物质的特征光谱包括激发光谱和荧光光谱，因此用它鉴定物质比紫外-可见分光光度法可靠。 二、定量分析 1. 标准曲线法 与紫外可见不同的是，配制一系列溶液后，常以其中浓度最大的一个溶液调节F值，使其处于仪器适宜的读数内。 F c Fx cx 2. 直接比较法 如果荧光物质的标准曲线过零点，且线性良好，可用直接比较法测定。 第四节 荧光新技术和应用 一、 有机物的荧光分析 由于荧光分析的高灵敏度、高选择性，使它在医学检验、卫生检验、药物分析、环境检测及食品分析等方面有广泛的应用。 芳香族及具有芳香结构的物质 在紫外光照射下能产生荧光。因此，荧光分析法可直接用于这类有机物的测定，如：多环胺类、萘酚类、嘌呤类、吲哚类、多环芳烃类、具有芳环或芳杂环结构的氨基酸及蛋白质等，约有200多种。 食品中维生素含量 几乎所有种类的维生素都可以用荧光法进行分析。多环芳烃普遍存在于大气、水、土壤、动植物及加工食品中，大家所熟知的苯并[a]芘是致癌活性最强的一种，通过萃取或色谱分离后，可采用荧光法进行测定。该方法准确可靠，测定最低浓度可达 0.1 ?g/ml。 应用实例：食品中VB2（核黄素）的测定 测定原理是VB2在440-500 nm波长的光照射下，发出黄绿色荧光，在波长535 nm下测定其荧光强度，在稀溶液中其荧光强度与VB2的浓度成正比。为消除试液中共存荧光杂质的干扰，可在测定过荧光强度的溶液中加入连二亚硫酸钠（Na2S2O4），将VB2还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余的荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中VB2的荧光强度。该方法被作为食品分析的国家标准分析方法。 二、 无机元素的荧光分析 能产生荧光的无机物较少，对其进行分析通常是将待测元素与荧光试剂反应，生成具有荧光特性的配合物，进行间接测定目前利用该法可进行荧光分析的无机元素已近70种。 常用的试剂： 8－羟基喹啉及其衍生物 它可作为Al、Ga、In、Sc、La、Mg、Zn、 Cd等元素的荧光测定。对于荧光光谱接 近，但是荧光寿命有差异的，可按照时 间荧光分析发测定。 黄酮类试剂 应用于周期表中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ族元素。 二氨基化合物 可测定Se,灵敏度较好。 你知道吗 有些元素虽不能与有机试剂形成能产生荧光的配合物，但它可使荧光物质的荧光熄灭。例如F-离子在一定pH的溶液中，能从Al3+与桑色素的荧光配合物中夺取Al3+，从而导致荧光配合物的荧光强度降低，其荧光强度与F-离子的浓度成反比，利用这一性质可间接测定样品中的氟离子含量。 应用实例：硒的测定 测定原理是将样品用HNO3和HClO4湿式分解，硒被氧化成H2SeO4，再加HCl加热，还原为H2SeO3。在酸性溶液中Se(Ⅳ)与2,3-二氨基萘发生特异反应，生成能发荧光的4,5-苯并苤硒脑，用环己烷萃取后进行荧光测定。此方法灵敏度高，选择性好，是测定硒的国家标准分析方法。 三、在生命科学中的应用 在临床测定生物样品中某些成分的含量时，由于这些物质荧光量子产率较低，所以常用各种荧光探针来间接测定。荧光探针还被广泛应用于研究蛋白质大分子构象及构象动力学信息。 荧光光谱可用以研究 DNA的烷基化损伤与修复；荧光偏振、荧光猝灭及多维荧光检测技术可用来研究蛋白质与配体之间的相互作用及动力学；时间分辨荧光免疫技术越来越多地用于许多蛋白质、激素、病毒抗原乃至 DNA杂交体等的分析。总之，荧光分析法在生命科学领域中的应用前景十分广阔。 河北联合大学 公共卫生学院 * 外转换：激发分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而转移能量的非辐射跃迁； 外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。 可见，凡是使 kF 增加，使其它去活化常数降低的因素均可增加荧光量子产率。通常，kF 由分子结构决定（内因），而其它参数则由化学环境和结构共同决定。 分子结构与荧光的关系 跃迁类型：如上所述，物质必须在紫外可见区有强吸收和高荧光效率才能产生荧光。