生物化学试验：血清醋酸纤维薄膜电泳.pptVIP

血清醋酸纤维薄膜电泳 实验操作考试 要求：1、每人一张薄膜 2、每人独立完成 3、考试结果直接 贴在 讲台上 白纸的学号处 操作要点：100V，40min 考试要求 开始到电泳前15min 电泳时间100v 40min 电泳结束后15min内完成显色，并粘贴在讲台上相应白纸处 动物肝组织中脱氧核糖核酸(DNA)的提取 生物化学与分子生物学实验四 提示：本次生化实验是最后一次，请同学们务必交齐实验报告！在报告首页标出自己每次的成绩！不交实验报告者，无平时成绩！ 【实验目的】 3、熟悉DNA提取的方法 1、学习离心技术，掌握离心机的正确使用 2、掌握DNA提取的原理 生物大分子制备方法的选择是以生物大分子的性质（如分子大小、形状、溶解度、带电性质等）为依据，对于结构和理化性质不同的生物大分子，所选用的分离提纯方法也不相同。 生物化学常用实验手段：比色、层析、电泳和离心四大技术。 【实验原理】 【实验原理】 一、动物细胞中核酸的存在形式（DNA、RNA） 二、肝细胞DNA提取 肝匀浆（离心分离得到细胞核） 10%氯化钠从核蛋白中分离出核酸(钠盐形式) 乙醇沉淀核酸钠 【操作】 1.制备匀浆 猪肝（已由实验中心的老师制备好） 2.分离抽提 肝匀浆倒入刻度离心管10ml 离心（3000转/分，3分钟） 倾去上清液，沉淀（加SSC至10ml搅匀） 离心（3000转/分，3分钟） 按书本操作 得到絮状白色沉淀，即DNA 三 实验结果与讨论 1 实验结果 画图，描述DNA提取过程中的实验现象 2 结论 3 实验分析 4 思考题：（1）共几次离心？每次要上清/沉淀？Why？ （2）提取过程加入各种试剂（如NaCl、氯仿、乙醇等等）的作用？ 离心机使用注意事项： 1.记住离心管编号； 2.离心管必须先平衡后才对称放入离心机； 3.避免液体洒在离心机上面或钻头中； 4.启动后，如有不正常噪音或震动，立即切断电源，分析原因，排除故障。 * * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。 * 分析用仅对小样品（小于1ml）进行分析（如分子量的测量）；制备用离心机是为提取、纯化大分子组分设计的，可对10～2000ml的样品进行分离。 （最大速度不超过10,000rpm）、 （最大转速20,000-25,000rpm）（最大离心力可超过75,000rpm，r=8cm）。 * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。本实验从动物肝组织中，分离提取RNA和DNA，并用酸水解法将其分解成基本组成成分戊糖、磷酸和碱基，然后分别进行鉴定。分离是关键：核酸往往与蛋白质组成核蛋白，核蛋白在三氯醋酸、乙醇中会发生沉淀，经反复离心、沉淀后将提取的核酸进行水解后分别鉴定。 * * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。 * 分析用仅对小样品（小于1ml）进行分析（如分子量的测量）；制备用离心机是为提取、纯化大分子组分设计的，可对10～2000ml的样品进行分离。 （最大速度不超过10,000rpm）、 （最大转速20,000-25,000rpm）（最大离心力可超过75,000rpm，r=8cm）。 * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。本实验从动物肝组织中