第3章免疫原和抗血清的制备多媒体.pptxVIP

;第一节 免疫原的制备 一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备和纯化 三、半抗原性免疫原的制备 ;第四节 抗血清的鉴定和保存 一、抗血清的鉴定 二、抗血清的保存;第一节 免疫原的制备;细胞抗原：绵羊红细胞 细菌抗原：菌体抗原、鞭毛抗原 寄生虫体抗原：虫卵;组织细胞抗原的制备： 高速捣碎法－组织捣碎机捣碎 研磨法－用玻璃匀浆器或乳钵研磨 ; 组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备： 反复冻融法－-20℃冻结，然后室温融化 超声破碎法－超声波（1～20kHz） 自溶法－自身酶系 酶处理法－溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶 表面活性剂处理法－SDS、去氧胆酸钠、二乙基十六烷基溴 ;免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶 ;超速离心法： 差速离心法－低速和高速离心交替进行 密度梯度离心法－区带离心法 ;选择性沉淀法： 核酸去除法－氯化锰、硫酸鱼精蛋、链霉素 盐析法－硫酸铵、硫酸钠 有机溶剂沉淀法－乙醇、丙酮 聚合物沉淀法－聚乙二醇 ;离子交换层析法： 利用蛋白质带电荷不同进行分离 离子交换剂： 离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂 ;亲和层析法：利用生物大分子之间具有的专一性亲和力 (1)亲和层析支持物的选择： ①非特异性吸附低； ②液体流速快； ③在各种pH和高浓度盐溶液中稳定； ④有合适丰富的化学基团，与蛋白质或其它化合物结 合； ⑤有丰富的微孔，以增加结合容量。 最常用的支持物是Separose4B ;(2)配体的选择条件： ①抗原或抗体必须单一特异性； ②抗原与抗体必须具有较高的亲和力； ③配体必须有一个适当的化学基团。;(3)抗原或抗体与支持物的结合： ①活化：溴化氰； ②接“手臂”：带“手臂”琼脂糖有氨基琼脂糖、羧基琼脂糖、溴乙酰琼脂糖、重氮盐衍生物琼脂糖、疏基琼脂糖。;(4)亲和层析条件的选择： ①封闭活性基团：用无关蛋白质或三乙醇胺过柱； ②除去未结合和结合不牢的蛋白：先用NaHCO3洗脱，再用解脱剂处理； 解脱???：3mol/L 硫氰酸钾（或钠）、0.1mol/L pH2.4甘氨酸缓冲液;电泳法： 利用分子量和电荷量不同进行分离 ;;;;;;第二节 免疫佐剂;;; 改变抗原物理性状，延缓其降解和排除，更有效刺激免疫系统。 刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力。 刺激淋巴细胞增殖和分化。 ;第三节 抗血清的制备 ;;抗原来源与动物种属的关系 种属差异越远，免疫原性越强 动物个体的选择 适龄、健康、体重符合要求 抗原的性质;免疫原的剂量 中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 免疫间隔时间 第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天 免疫途径 皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结 ;颈动脉采血法：家兔、绵羊、山羊 心脏采血法： 家兔、豚鼠、大鼠、鸡 静脉采血法： 家兔、山羊、绵羊 ;第四节 抗血清的鉴定和保存;抗体特异性的鉴定：双向免疫扩散法 抗体效价的鉴定：凝集试验 、双向免疫扩散试验、ELISA 抗体纯度的鉴定：SDS、双向免疫扩散试验、免疫电泳 抗体亲合力的鉴定：平衡透析法、ELISA、RIA竞争结合试验 ;2℃～8℃保存：短期保存 冰冻保存：保存5年 真空干燥保存：保存5～10年;第五节 抗血清的纯化;盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层析柱 ;亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗 原混合液制成固相吸附剂;1．什么是免疫原？ 2．如何制备可溶性抗原？ 3．常用的细胞破碎方法有哪些？ 4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方法有哪些？ 5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？ 6．什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？免疫佐剂的作用机制有哪些？ 7．什么是抗血清？什么是多克隆抗体？ 8．如何制备抗血清？ 9．动物采血有哪些方法？ 10．抗血清的鉴定包括哪些内容？;小 结