医学检验教材课件第三章 病毒检验基本技术.ppt

李燕 2.酶免疫组化技术 该法与IFA的原理相似，不同的是将荧光标记改为辣根过氧化物酶标记，常使用间接法 特点：无需荧光显微镜，用普通光学显微镜或肉眼可观察反应，染色标本能长期保存，制剂可较长期应用，是一种较特异、快速、简便的方法 应用：主要用于检测培养细胞中的病毒抗原和组织切片、印片细胞中的病毒抗原，较少用于临床病毒标本检测，原因是临床标本中可能存在的内源性过氧化物酶易产生非特异性染色，造成假阳性，其敏感性和特异性也不如免疫荧光技术 3.ELISA 常用ELISA试验有间接法、双抗夹心法、竞争法和捕获法 特点：价廉、快速简便、无需特殊设备，试剂比较稳定，可用机器判读结果，便于自动化和一次性检测大量标本 应用：该技术使用广泛。病毒学实验室用ELISA可发现常规细胞培养难以增殖的病毒，如甲、乙、丙型肝炎病毒和轮状病毒 4.免疫胶体金技术 该法是用胶体金作标记物，胶体金在合适的条件下与病毒抗原或抗体形成稳定结合的标记物，但不影响被标记抗原(或抗体)的免疫活性，胶体金本身带有紫红色作为标志，可用肉眼直接观测结果 特点：随着胶体金标记技术的不断改进，其敏感性大大提高 应用：该技术在临床病毒学检验中应用广泛，目前已有检测轮状病毒、流感病毒等病毒抗原的胶体金试剂盒应用于临床诊断 5.乳胶凝集试验 该法是一种间接凝集试验，即将抗原（或抗体）致敏胶乳颗粒，直接与待测标本中的抗体（或抗原）发生凝集反应，常用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳 特点：胶乳为人工合成的载体，性能稳定，均一性好 应用：目前已成为常用的免疫技术，可用于测定轮状病毒、巨细胞病毒、乙肝病毒等 6.发光免疫技术 主要有化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析。检测时将化学发光物质或酶作为标记物直接标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物，随后加入氧化剂或酶的发光底物，经反应形成激发态的中间体，发射光子释放能量，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测 特点：灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术 应用：临床应用已非常成熟，有取代放射免疫分析技术和酶联免疫分析技术而成为诊断市场上的主流产品的趋势。目前在病毒检测方面常用于检测甲、乙、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒、SARS冠状病毒及肠道RNA病毒抗原的检测 1．IgM特异抗体检测 病毒抗体检测方法与前述病毒抗原的检测方法具有通用性，但需根据病毒种类、实验室条件进行选择 特点：感染机体后，特异性IgM抗体出现早，IgM抗体的测定有助于早期诊断，但感染机体产生IgM抗体有明显的个体差异 应用：应用于多种病毒如风疹病毒、HAV、CMV、HSV、轮状病毒等的早期诊断 2．IgG特异抗体检测 方法：常用方法为ELISA间接法或捕获法、化学发光免疫测定 特点：IgG抗体虽较IgM抗体出现晚，但对尚无病毒分离培养方法或难以分离培养的病毒仍具有辅助诊断价值，同时也是病毒流行病学调查的重要指标，并有助于了解个体既往感染 应用：目前已广泛用于肝炎病毒、风疹病毒、CMV、HSV、EB等IgG抗体或总抗体检测 二、分子生物学检验技术 二、分子生物学检验技术 1.核酸杂交技术 2.聚合酶链反应技术 3.基因芯片技术 4.基因测序技术 （一）核酸杂交技术 1.斑点杂交(dot blot hybridization) 可用于大多数病毒核酸和PCR产物的检测 2.原位杂交(in situ hybridization) 将病毒感染细胞固定后，在不破坏细胞结构的情况下，在细胞原位释放暴露出病毒的DNA或RNA，加入标记的病毒特异核酸探针进行杂交。通过显色技术可直接观察病毒在细胞内位置和核酸数量 3.DNA印迹(southern b1ot)和RNA印迹(northern blot) 可以检测病毒的DNA或RNA中的特异序列 注意使用超链接 第三章 病毒检验基本技术 目 录 第一节 病毒的形态学检查 第二节 病毒的培养与鉴定技术 第三节 病毒的非培养检验技术 第一节 病毒的形态学检查 一、显微镜技术 光学显微镜一般用于观察有些病毒在宿主细胞增殖后于细胞核内或细胞质内出现的包涵体（inclusion body），对病毒感染的诊断有一定价值 包涵体的观察需要进行细胞染色。常用的染色液有姬姆萨和苏木精-伊红两种 一、显微镜技术 （一）胞质内包涵体 如：狂犬病毒（嗜酸性包涵体，又称内基小体(Negri body)） 呼吸道合胞病毒（轻度嗜酸性） （二）胞核内包涵体 如：巨细胞病毒（细胞核周围绕有一轮(晕)的大型嗜酸性包涵体） 单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒（均出现嗜酸性包涵体和巨核细胞） 腺病毒（早期感染后包涵体呈嗜酸性，逐渐成熟后变成嗜碱性） （三）胞质内和胞核内包涵体 如：