蛋白质测序分离及提纯.pptVIP

2.7.2 蛋白质纯化 总目标：增加制品纯度或比活 1.前处理：因动/植物/细菌而异 2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶 第三十页，共52页。 （一）利用溶解度差别的分离方法 1. 等电点沉淀和pH控制 当蛋白质处于等电点pH值，蛋白质的净电 荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有斥力而 趋向于凝聚而沉淀。不同蛋白质具有不同的等 电点，利用蛋白质在等电点时溶解度最低的理 可以把蛋白质混合物分离开来。 蛋白质混合物的分离纯化方法 第三十一页，共52页。 2. 蛋白质的盐溶和盐析 中性盐对蛋白质有明显的溶解度影响。在低 浓度时，中性盐增加蛋白质的溶解度，这种现象 称盐溶。盐溶主要由于蛋白质分子吸附某种盐类 离子后，带电表层使蛋白质彼此排斥，而蛋白质 分子与水分子之间的相互作用却加强。 盐析：在蛋白质溶液中大量加入中性盐使水 的活度降低，原来溶液中大部分自由水转变为盐 离子的水化水，从而降低蛋白质极性基团与水分 子之间的相互作用，破坏蛋白质分子表面的水化 层。 第三十二页，共52页。 3. 有机溶剂分级法 有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。例如，20℃时水的介电常数为80，而82％乙醇水溶液的介电常数为