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黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：阿米卡星对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤作用 5 1 材料与方法 6 2 结 果 8 3 讨 论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用 文1：黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用 黄绿青霉素(CIT)是黄绿青霉的次级毒性代谢物，能在较低的温度和较高的湿度下生长〔1〕， 自然 界中广泛存在，容易污染新收获的农作物，呈黄绿色霉变，食用后可发生急性中毒，是一种与人类生活密切相关的真菌毒素。现已证明，该毒素具有神经毒作用〔2〕及致畸性〔3〕。也有研究认为，其可能是克山病的病因〔4〕。该毒素在体外能抑制人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）活性及白色念球菌生长〔5〕。本文旨在从体内和体外水平观察黄绿青霉素的心脏毒性作用。 1 材料与方法 11 仪器和试剂 Olympus光学显微镜和倒置显微镜：CO2恒温培养箱；超速低温离心机；净化工作台；Millipore超纯水系统；spc-10Avp液相色谱仪(日本岛津公司)；Uv-VIS检测器；数据采集和处理使用的色谱工作站；凯氏振荡器；手术器械及细胞培养瓶等。黄暗青霉菌(Penicillium citreonigrum Dierckx,PCV)(中科院微生物研究所)；CIT标准品和胶原酶Ⅱ(美国Sigma公司)；最低必需培养基(MEM)和胎牛血清(美国GIBCO公司)；胰蛋白酶(美国AMRESCO公司)；其余试剂均为国产分析纯。 12 实验动物 雌性Wistar大鼠，体重80～120g(哈尔滨市兽医研究所)；观察和检疫1周。出生1～3d Wistar乳鼠(哈尔滨医科大学附属第一 医院 实验动物中心) 13 心肌细胞原代培养 新生Wistar乳鼠，无菌取心肌，清洗并剪碎，01％胰蛋白酶消化5min后弃去，加入10ml 1mg／ml的胶原酶Ⅱ，37℃下消化30～40min，500r／min离心5min，含20％胎牛血清的基础培养液制成细胞悬液，37℃，5％CO2温箱内培养。根据心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同，采用差速贴壁分离法，并在前3d的培养液中加入01mmol/L 5-溴脱氧核苷酸，以抑制成纤维细胞的增殖。 14 黄绿青霉素致离体心肌细胞损伤的电镜观察 CIT连续倍比稀释成25，25μmol/L剂量组，按常量分别加入已基本长成单层的心肌细胞中，同时设立正常细胞对照组。24h后将细胞刮下，25％戊二醛固定，常规电镜检查。 15 黄绿青霉素致大鼠心肌组织的毒性观察 黄绿青霉素的生物合成〔1〕，并利用高效液相色谱法进行检测〔6〕。Wistar大鼠随机分为2组，每组7只，分笼喂养。A组作为正常对照组，饲以普通饲料；B组给予15mg／(kg·d)CIT，并随体重增加而增加。8周后处死动物，剪取心肌组织，10％甲醛固定，常规病理学检测。 2 结果 21 CIT对心肌细胞超微结构的影响 培养的心肌细胞，体积较大，表面光滑，胞质内有肌丝散在分布，Z线清晰，质膜下游离核蛋白体丰富，线粒体发达，嵴明显可见。25μmol/L剂量组，肌细胞为不规则形，细胞核内高密度的染色质边集核膜下，核周Z线结构清晰，肌丝明显，胞质内存在脂滴颗粒，线粒体嵴清晰，相邻细胞以脂膜紧贴，未见连接结构，部分线粒体出现空泡变性。25μmol/L剂量组，未见完整的肌细胞结构，疑为肌细胞的胞质内有大量的脂滴颗粒存在，细胞功能状态不佳，其他肌细胞轮廓不清，胞质内线粒体高密度团块状，嵴微细结构不明显，见图1～3。 图1 电镜下正常培养心肌细胞（略） 图2 电镜下25μmol/L CIT处理的心肌细胞（略） 图3 电镜下25μmol/L CIT处理的心肌细胞（略） 22 黄绿青霉素对实验动物体重及脏体比值的影响 实验开始时，实验组与对照组体重比较，差异无统计学意义(P＞005)。给予CIT后，实验组体重无明显增加，对照组体重增长明显(P001)。实验组大鼠的心、肝、肾脏与体重的比值均高于对照组，差异有统计学意义(P001) 23 黄绿青霉素对大鼠心肌组织结构的影响 光镜下，对照组心肌纤维排列规整，无明显异常。实验组大鼠心室肌均出现明显病变，病变呈灶状或条索状分布，涉及范围较大，有大量淋巴细胞和单核细胞浸润，间质水肿，心肌细胞呈颗粒变性，肌浆凝聚，肌原纤维凝集、崩解，部分心肌细胞空泡变性，见图4，5。 图4 CIT处理组心室肌病变(HE染色，×40)（略） 图5 CIT处理组心室肌(HE染色，×200)（略）