实验9 Teles微量快速乳糖测定法.docVIP

PAGE PAGE 1 实验9 Teles微量快速乳糖测定法 一、原理： 乳糖是由一分子葡萄糖和一分子半乳糖缩合而成的双糖。由于其分子上具有还原性的醛基，在碱性条件下，经加热氧化与酚类作用生成橙色或红色的物质。被测样品中乳糖的浓度与形成的有色物质的量呈正比关系。因此可以通过测定已知乳糖浓度的标准样品的OD520或制作标准曲线。并与未知样品的OD520进行比较以计算出未知样品中的乳糖含量。 本方法简单、快速、精确，适用于测定奶清中的乳糖浓度。 二、试剂： 新鲜牛奶或奶清： 4.5%的氢氧化钡 1%酚，棕色瓶保存 1%苦味酸 5%硫酸锌 5%氢氧化钠 1%亚硫酸氢钠，暗处保存，只能使用三天； 标准乳糖溶液（1mg/ml） Teles应用液：依照1：2：2：1的体积比例，把1%酚溶液，5%氢氧化钠，1%苦味酸，1%亚硫酸氢钠依次混合。临用前配制，棕色瓶保存。 三、设备： 试管、离心机、电炉、冰浴、722分光光度计等 四、操作方法： 取0.1ml鲜奶，将8ml蒸馏水加入长试管中，使样品稀释81倍。吸取奶稀释液2ml加入短试管中，加5%硫酸锌0.2ml，4.5%的氢氧化钡0.2ml，允许混匀，置冰浴5分钟，然后3000转/分离心8分钟，以除去蛋白质。准备两支试管，先将上清液倒入另一试管中，分别加入上述去蛋白上清液0.5ml 。在每支试管中加进1.2ml Teles应用液。充分混匀，