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增龄对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：增龄对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：Caspase3与脑缺血再灌注损伤临床医学 5 1 Caspase3与细胞凋亡 6 2 脑缺血再灌注与神经细胞凋亡 7 3 Caspase3与脑缺血再灌注损伤 8 4 结 语 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 增龄对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响临床医学 文1：增龄对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响临床医学 脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)导致的急性脑损伤，严重影响患者的预后和功能恢复。对于这个复杂多环节病理过程，其病情的 发展 和转归尚不明确。本文旨在通过研究不同年龄组大鼠局灶性CI/RI时脑损伤的改变，了解年龄对CI/RI的影响。 1 材料与方法 药品和试剂 氯化三苯基四氮唑(TTC)(上海化学试剂公司),磷酸盐缓冲液配制,避光低温贮存;生化试剂盒(购自南京建成生物工程研究所);其余试剂均为国产分析纯。 实验动物与分组 雄性SD大鼠，由 中国 科学 院上海实验动物中心提供，动物编号为SCXK(沪)20070005。其中10周龄大鼠体重(190±20)g;16周龄大鼠体重(260±20)g。不同年龄组大鼠分别分为假手术组、CI/RI模型组。术前12 h禁食,自由饮水。 模型制备 用直径 mm尼龙线作栓子,参照Longa 等〔1〕腔内线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞(MCAO) 模型。局部脑缺血2 h、拔出线栓行再灌24 h。 神经症状缺失评分 按5分制评分标准，术后评1～3分者为手术成功标志;0分：无明显神经病学症状;1分：不能完全伸展左前肢;2分：向左侧旋转;3分行走时向左侧倾斜;4分：不能自行行走。 脑损伤范围测定 再灌24 h时迅速断头取脑，4刀5分法沿冠状切面切片，2% TTC染色后，正常组织呈红色，损伤组织呈白色。CAD 计算 机软件计算损伤面积，以占双侧大脑半球面积的百分比作为损伤面积〔2〕 病理形态改变 取视交叉至漏斗柄的脑冠状切片，置10%福尔马林中固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤，5 μm脑组织冠状切片作HE染色，观察脑形态学变化。 脑组织LD、LDH的活性测定 取脑组织与生理盐水制成10%组织匀奖，3 500 min离心10 min。取上清于-20℃保存备用。LD及LDH的测定严格按试剂盒说明进行。 血清LDH、CK的活性测定 再灌24 h时迅速断头取血，分离血清样本,LDH、CK的测定严格按试剂盒说明进行。 统计学处理 实验数据以x±s表示,组间差异用t检验。 2 结 果 各组大鼠神经症状缺失评分 与假手术组比较，10周龄CI/RI组与16周龄CI/RI组的大鼠均表现不同程度的神经症状缺失(P)。与10周龄CI/RI组比较，16周龄CI/RI组神经症状缺失明显严重(P)，见表1。表1 CI/RI时神经症状缺失评分、脑损伤面积的变化1)与同周龄假手术组比较，2)与10周龄CI/RI组比较：P，下表同 各组大鼠脑损伤范围变化 与10周龄CI/RI组比较，16周龄CI/RI组脑损伤面积扩大(P)，(见表 1，图 1) 各组大鼠病理形态学的改变 假手术组，皮层神经细胞排列整齐，分布均匀，层次清楚，大小一致，胞膜完整，胞浆均匀，核膜清楚，染色质颗粒细小均匀，有一小核仁。10周龄CI/RI组，大脑皮质部分细胞消失，数目减少，排列紊乱，星形胶质细胞增生，胞核深染，形态大小不一，血管周围出现空晕，间质疏松。16周龄CI/RI组，大脑皮质部分细胞消失，数目减少，排列紊乱，细胞体积大小不一，形态不规则，有呈三角形、菱形和不规则形，胞核深染，大小形态不一，核膜不清，核仁不明显。中心区域出现坏死;星形胶质细胞增生，胶质结节形成，血管扩张充血，其周围出现空晕，间质疏松，呈网状改变等。见图2。 各组大鼠脑组织LD、LDH含量变化 与同周龄假手术组比较，10周龄CI/RI组LD、LDH水平显著降低(P)，16 周龄CI/RI组LD、LDH水平显著低于10周龄CI/RI组(P)(表2) 各组大鼠血清CK、LDH含量的变化 与同周龄假手术组比较，CI/RI组CK、LDH含量显著升高(P)。16周龄CI/RI组血清中的CK、LDH含量明显高于10周龄CI/RI组(P0. 01)(表3)。表2 CIRI时大鼠脑组织中LD、LDH的变化表3 CIRI时大鼠血清中CK、LDH含量的变化(x±s) 3 讨 论 大量研究表明，CI/RI主要与氧化应激反应〔3〕、能量代谢障碍〔4〕、