MCI186减轻Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究临床医学.docVIP

MCI186减轻Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：MCI186减轻Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 5 文2：依达拉奉对Aβ140诱导PC12细胞NFκBBcl2mRNA和蛋白表达的影响临床医学 7 1材资料与方法 8 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 MCI186减轻Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究临床医学 文1：MCI186减轻Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的研究临床医学 AD是常见的中枢神经系统退行性疾病，在众多的发病机制中，更多的学者倾向于其核心改变是tau蛋白过度磷酸化。目前临床上用来 治疗 AD的药物均只能改善轻中度患者的部分症状，不能减轻脑内的病理改变，阻止病情的进展，对tau蛋白的过度磷酸化没有逆转作用。依达拉奉(MCI186)是一种自由基清除剂，可以特异性清除羟自由基(OH)，抑制氧化应激及其继发的细胞凋亡，发挥神经保护作用，主要应用于脑梗死的早期和脑出血的治疗。临床发现依达拉奉对部分痴呆患者有改善症状的作用，从而提示其可能是一种具有前途的治疗AD的药物。本研究旨在探讨依达拉奉对tau蛋白过度磷酸化是否有逆转作用。 1 材料与方法 药品与试剂 PC12细胞购自 中国 生命 科学 院上海细胞所，Aβ140、兔抗鼠IgG购自北京鼎国生物公司，Tau〔PS396〕多克隆抗体、Tau〔PS199/202〕多克隆抗体购自Biosource公司，Tau5单克隆抗体购自BD Pharmingen公司，Protein Marker购自美国Biolabs公司，DAB显色试剂盒购自博士德公司,依达拉奉购自江苏先声药业有限公司。 方法 细胞培养和预处理 用含有15%胎牛血清的DMEM培养基( g NaHCO3)，置于37℃，5% CO2孵箱中培养，每3天传代1次，传代时用机械方法吹打贴壁的PC12细胞，取生长期细胞用于实验。 实验分组 Aβ140诱导分化PC12细胞tau蛋白磷酸化 将30 μmol/L Aβ140作用于PC12细胞，分别作用0，3，6，12，24，36 h后提取蛋白检测Tau〔PS396〕、Tau〔PS199/202〕及Tau5磷酸化水平。 LiCl对Aβ140诱导分化PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响 实验分为3组：(1)对照组：正常PC12细胞;(2)模型组：加入浓度为30 μmol/L Aβ140作用于PC12细胞12 h;(3)LiCl处理组：加入浓度为10 mmol/L LiCl与30 μmol/L Aβ140共同作用于PC12细胞12 h;检测Tau〔PS396〕，Tau〔PS199/202〕，Tau5及GSK3β，GSK3βSer9磷酸化水平。 MCI186对Aβ140诱导分化PC12细胞tau蛋白过度磷酸化的影响 分3组：(1)对照组：不加任何处理因素;(2)模型组：加入浓度为30 μmol/L Aβ2535作用于PC12细胞12 h;(3)保护组：将20 μmol/L MCI186处理PC12细胞2 h后与30 μmol/L Aβ140共同作用于PC12细胞12 h;分别检测Tau〔PS396〕、Tau〔PS199/202〕、tau5及GSK3β，GSK3βser9磷酸化水平。 蛋白免疫印迹法(Western印迹法) 常规蛋白质提取; 采用bradford(1976)法进行蛋白质定量。一抗为Tau〔PS396〕多克隆抗体、Tau〔PS199/202〕多克隆抗体、Tau5单克隆抗体、GSK3β、GSK3βser9抗体，二抗为兔抗鼠IgG。 统计学分析 所有数据均采用x±s表示，采用统计软件完成，并用EXCEL软件制图。 2 结 果 Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化水平的变化 tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平在Aβ140作用3 h后开始升高，达高峰12 h后逐渐降低;Tau5是磷酸化非依赖性抗体，反映细胞中tau蛋白的总量，其变化趋势与tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化增高相一致，提示Aβ2535在诱导PC12细胞致tau蛋白磷酸化增高的同时，也增加tau蛋白总量，见图1。 Aβ140诱导PC12细胞tau蛋白过度磷酸化分子机制 LiCl对Aβ140诱导分化PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响 凝聚态Aβ14