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赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：当代功能系统下音乐教育 6 一、对音乐教育审美功能的再认识 6 二、对音乐教育德育功能的再思考 7 三、对音乐教育文化功能的再确认 8 四、对音乐教育智力功能的再重视 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响 文1：赤灵芝提取物对小鼠免疫功能系统的影响 灵芝多糖是灵芝中的主要免疫药另学活性成分，其作用主要表现在：①对正常小鼠的免疫功能具有增强作用;②增强人脐血LA K 细胞活性，且呈剂量依赖关系;③对免疫抑制药物(如氢化可的松、环孢霉素A、环磷酰胺等)和抗肿瘤药物(如氟尿嘧啶、丝裂霉素C 和阿糖胞苷等)及应激、衰老等因素所致小鼠免疫功能低下具有明显的恢复作用 〔1～3〕。本试验拟赤灵芝提取物对小鼠免疫系统的影响，为开发和利用赤灵芝的药用和保健价值提供 科学 依据。 1 材料与方法 实验动物及分组 昆明种雄性健康小白鼠50只，体重18～22 g，由长春生物制品所提供合格证号为101001。随机分为5组，正常对照组(生理盐水)和赤灵芝水提取物低(260 mg/kg)和高剂量(520 mg/kg)组及赤灵芝醇提取物低(260 mg/kg)和高剂量(520 mg/kg)组各10只，连续灌胃15 d。 试剂 赤灵芝水提取物和醇提取物均为25 g生药/g粉。RPMI1640完全培养液(GIBCO产品)，小牛血清，刀豆蛋白(ConA)液均为Sigma产品，绵羊红细胞(SRBC)，豚鼠血清。 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)〔4〕 末次给药后1 h在超净台内，无菌取小鼠脾于无菌Hanks液培养皿内，用毛玻璃片磨碎，过滤细胞悬液，洗涤一遍，1 000 min，离心5 min，用2 ml RPMI1640培养液悬浮细胞，取10 μl细胞悬液，调细胞浓度至2×106/ml，加入24孔培养板，每孔1 ml/孔。实验孔加入ConA 20 μl，终浓度5 μg/ml。37℃，5%CO2孵箱内培养68 h，倒置显微镜下观察细胞形态。每孔吸去培养上清液 ml，再加不含血清的RPMI1640培养液，加入MTT溶液50 μl/孔(5 mg/m1)，继续孵育4 h，加入酸性异丙醇溶液1 ml/孔，吹打混合均匀，待颗粒结晶完全溶解。将溶解液分加到96孔板中，200 μl/孔，每个样本作3复孔，酶标仪上读出OD570nm值。 足跖增厚法测定小鼠迟发型变态反应(DTH)〔4〕 于给药后11 d对小鼠进行致敏，每只小鼠腹腔注射2%绵羊SRBC ml/只进行免疫，免疫4 d后，测量左后足跖部厚度，然后，在测量部位皮下注射20%(V/V)SPRC 20 μl/只，注射后于24、48 h分别测量左右足跖部厚度，同一部位测量3次取平均值。 半数溶血值(HC50)测定 于给药11 d对小鼠进行腹腔注2%(V/V)SRBC ml/只进行免疫，免疫4 d后处死小鼠取血离心(2 000 min，10 min)，收集血清并用SA液稀释500倍，取1 ml稀释血清加入10%(V/V)SRBC 0 5 ml，补体10 ml进行血清溶血素测定，记录羊红血球的半数溶血值(HC50) 抗体形成细胞(AFC) 检测 免疫方法同，细胞悬液取得方法同，调细胞浓度至5×106细胞/ml。空斑测定：将1%琼脂糖融化后，45℃水浴保温，与等量的2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，1 ml/管。再向管内加100 μl 10%的SRBC和40 μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾注于底层凝胶表面，制成顶层凝胶。待琼脂凝固后，置37℃放置1～ h;再加10倍稀释的补体溶液1 ml，37℃放置1～ h后，计数空斑形成数，用空斑数/106脾细胞来表示，受试组显著高于对照组的空斑数，即可判断该项实验结果阳性。 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力测定 末次给药后30 min，每鼠ip 20%鸡红细胞溶液1 ml/只，注射后30 min脱颈椎处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2 ml，轻轻揉动每鼠腹部1 min，然后用吸管吸取腹腔液体l ml，均匀涂于2片载玻片上，放入垫有温纱布的搪瓷盆内，37℃水温，30 min后，生理盐水漂洗，1∶1丙酮甲醛液固定4%(V/V)Giemsa一磷酸缓冲液染色3 min，镜下计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和 计算 吞噬百分率及吞噬指数;吞噬指数=(被吞噬鸡红细胞数/200个巨噬细胞)/2，吞噬百分率=(吞噬鸡红细胞的巨噬细