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铝对大鼠海马组织形态学及细胞凋亡相关基因表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：铝对大鼠海马组织形态学及细胞凋亡相关基因表达的影响 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 铝对大鼠海马组织形态学及细胞凋亡相关基因表达的影响 文1：铝对大鼠海马组织形态学及细胞凋亡相关基因表达的影响 第一高丽萍(1962)，女，教授，博士，硕士生导师，主要从事阿尔茨海默病的研究。 阿尔茨海默病(AD)与细胞凋亡的关系已引起人们的重视，在培养细胞、动物模型及AD 病人的尸解中均发现细胞凋亡的证据。研究发现AD患者脑中铝含量普遍增高,过量接触铝会导致AD样记忆力减退、组织器官病理改变和代谢物质的异常变化,提示铝中毒与AD的发生密切相关〔1〕。目前AD的发病机制尚未明确，铝引起大鼠海马组织形态学改变与细胞凋亡相关基因Bcl2、Bax、p53表达的关系报道较少。为此笔者采用氯化铝对大鼠进行亚慢性染毒，研究大鼠海马组织形态学的改变以及与Bcl2、Bax、P53表达变化的关系。 1 材料与方法 动物分组与处理 选用北京医科大学实验动物中心提供的体重(350±20)g健康3月龄SD大鼠48只(清洁级，合格证号000004)。采用普通饲料适应性饲养1 w后，按体重随机分为4组，每组12只。其中对照组喂普通饲养；染毒组分别在普通饲料的基础上，按体重8%的进食量添加氯化铝 (AlCl3 6H2O，化学纯，天津双船化学试剂厂)，剂量分别为低剂量组： mg/kg体重，中剂量组： mg/kg体重，高剂量组： mg/kg体重，动物自由饮水，动物房温度(20±2)℃。喂饲90 d后，从每组随机抓取4只大鼠，采用4%水合氯醛按1 ml/100 g体重腹腔注射，麻醉后固定大鼠，从大鼠胸骨剑突处开胸，经左心室插管至主动脉，快速灌注 mol/L的冷生理盐水100 ml冲洗血液，之后用4%多聚甲醛500 ml灌注，取脑组织(海马)后立刻固定于4%多聚甲醛中，石蜡包埋用于观察脑组织形态改变。剩余各组大鼠迅速断头处死，在冰块上剥离脑组织，取部分海马准确称重测铝含量，其余海马组织用70%冰乙醇4℃固定，用于流式细胞分析。 脑区病理形态学检查 常规石蜡切片，HE染色，观察脑组织形态改变。 海马铝含量的测定 大鼠海马准确称重后，加入5 ml消化液(高氯酸∶硝酸=1∶4)湿法消化，待消化完全后用去离子水定容至25 ml,采用TAS990原子吸收分光光度计测铝的含量。 Bc12、Bax和p53蛋白表达检测 大鼠海马经70%冷乙醇4℃固定24 h以上，采用网搓法制备单细胞悬液，取制备好的单细胞悬液约1×106/ml，用PBS液离心洗涤2次，1 000 min离心，每次2 min，弃去上清，分别加入1∶100稀释的鼠抗人Bc12单克隆抗体、兔抗人Bax多克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体100 μl，在37℃水浴中温育30 min；用PBS洗2次，弃上清分别加入1∶100稀释的羊抗鼠FITCIgG及羊抗兔FITCIgG 100 μl，37℃温育30 min，PBS洗涤2次，离心弃上清，除去未结合的多余荧光抗体；上机检测前加入 ml PBS液，经400目筛网过滤至样品管中，用流式细胞仪检测。以荧光表达量代表Bc12、Bax和P53基因产物的表达量。 数据处理 采用统计软件对数据进行分析。 2 结果 大鼠脑组织形态学变化 在光镜下观察，对照组大鼠皮层、海马细胞排列规则(图1A)。高剂量组大鼠皮层锥体神经元数目明显减少、排列紊乱、层数减少；海马CA1区神经细胞排列紊乱，层数减少，神经元数目减少(图1B)；锥体细胞颗粒空泡变性(图1C)，胶质细胞增多、深染，并可见许多有空晕的固缩细胞(图1D)；CA3区发现许多细胞内有神经纤维缠结(NFT)样改变(图1E)。低剂量与中剂量组大鼠脑组织少数神经细胞也呈现同上病变。 大鼠海马铝含量变化 给铝盐90 d后，3个剂量染毒组大鼠海马铝的含量〔分别为低剂量组:(±) μg/g湿重，中剂量组:(±) μg/g湿重，高剂量组:(±) μg/g湿重，明显高于对照组(±) μg/g湿重〕(P＜)；各染毒组之间海马铝的含量也有显著差异(P＜)，且随染毒剂量的增加而增加(r=，P＜) 大鼠海马神经细胞Bcl2 、Bax、p53表达的变化 由表1可见，3个剂量染毒组大鼠海马Bcl2表达明显低于对照组(P＜)，Bax、p53表达明显高