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小绿萼”梅离体快繁体系的建立 摘要：以梅花品种小绿萼 1 年生枝条为试验材料，研 究了采样时间、初代培养基、基本培养基和激素组合等对带 芽茎段离体繁殖的影响。 结果表明：（ 1）最佳采样时间为 4 ― 6 月;（2）最佳腋芽诱导培养基为 1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+05 mg/L KT+0.1 mg/L NAA; （3）最佳增殖培养基 QL+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,增殖系数为 427; （4）无菌苗在 200 mg/L IBA浸渍处理数秒后，移植到1/2 QL培养基中，生根率为80%。 关键词：梅花 ;离体快繁 ;茎段 ;培养基 中图分类号： S685.170.4+3 文献标志码： A 文章编号： 1002-1302（2015） 04-0062-03 收稿日期： 2014-05-09 基金项目：国家自然科学基金（编号： ;国家 “863”计划（编号： 2011AA100207）。 作者简介：杨丽青（1986―），女，山西朔州人，硕士， 从事园林植物遗传育种研究。 E-mail： 1270063665@ 。 通信作者：张俊卫，博士，副教授，从事园林植物遗传 育种研究。 E-mail： zjw@ 。 梅是原产中国的传统名花，有悠久的栽培历史和丰富的 栽培品种，具有极高的观赏价值和经济价值。在生产上，梅 花以扦插、嫁接等无性繁殖为主，虽然能保持品种的优良性 状，但是繁殖系数小，周期长。利用组培快繁技术，不仅可 在短期内快速大量繁殖基因型一致的优质苗木，而且可获得 无病毒苗木，大大加快了育苗进程和提高了苗木质量。自 Harada 等[1] 开展梅茎段离体繁殖以来， 国内外在梅的离体快 繁上取得了较快的进展 [2-5] ，但目前仍存在建立快繁体系的 梅花品种少，部分品种在快繁过程中出现顶芽坏死、叶片黄 化等难题。小绿萼是武汉地区的梅花老品种，具有极高的观 赏价值。本研究旨在分析茎段采集时间、启动和增殖培养基 对小绿萼离体繁殖的影响，以期建立其快繁体系，为该品种 的应用推广提供一定的基础。 1 材料与方法 1.1 材料 供试材料采于武汉市磨山中国梅花研究中心，除 8 — 9 月份停止采样，分别在3 —11月中旬采集梅花品种小绿萼（图 1-A） 1 年生枝条，用冰盒带回实验室。 1.2 方法 1.2.1外植体灭菌及初代培养 采集回来的枝条剪成1〜 2 cm长的具节茎段，每茎段1〜2个腋芽。用洗洁精浸泡10〜 20 min，流水冲洗30 min后在超净工作台上用 75%乙醇浸润 30 s,转入0.1%HgCI2中消毒8〜15 min，然后用无菌水冲洗 6〜7次，无菌滤纸拭干后接种于初代培养基 （1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA）;为分析不同初代培养基对腋芽诱导的影 响，以 4 月中旬采集的小绿萼枝条为材料，灭菌后接种至 2 种不同初代培养基： 1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+01 mg/L NAA 和 1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L KT 。每处理 20 个外植体，重复3次，接种30 d后统计诱导率，污染率在接 种后10〜15 d内统计。 122腋芽增殖培养 将伸长到1〜2 cm的腋芽切下，分 别转入添加了 1.0 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA的3种基本培养 基和添加不同浓度 6-BA和NAA组合的QL培养基中，观察腋 芽的增殖， 每处理 10 个外植体， 重复 3次，记录植株高度， 生长情况，接种 5 周后统计腋芽增殖情况。 1.2.3 丛生长度对继代的影响 待腋芽增殖形成的丛生 芽伸长到不同长度（0.1、0.5〜1、1〜2 cm）时，将其从基 部切下，放入继代培养基（ 1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L KT）中观察其生长，每处理 5个外植体，重复 3 次。 1.2.4 生根与移栽 选择生长健壮，株高超过 2 cm 的试 管苗在 5 种生根培养基中进行生根培养。移栽时先将生根苗 连培养瓶一起置于温室内进行为期 10 d 的炼苗， 在此期间逐 渐松开并揭去培养瓶的盖子，而后将植株根系上的培养基洗 净，移栽到含有泥炭 ：蛭石=1 : 1 （体积比）的塑料盆 中。移栽后的第 1 周塑料盆上覆盖塑料薄膜以保湿， 1 周后 慢慢揭去。 125培养条件 培养室温度为（23 ± 2） C,空气相对 湿度为60%左右，光照度为1 500〜2 000 lx，光照周期为14 h/d。 2 结果与分析 2.1 采样时间对腋芽诱导率的影响 茎段接种 1 周后腋芽开始萌发， 2 周后腋芽开始伸长， 叶片逐渐展开，叶色浓绿（图 1-B）。不同时间采