发酵工艺学菌种选育知识课件(powerpoint 65页).pptVIP

筛选营养缺陷型的步骤 诱变 淘汰野生型 检出缺陷型 确定生长谱 第三十一页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 淘汰野生型 抗生素法：由于细菌或酵母对一些抗生素敏感，在MM中一定量的抗生素，杀死活化状态的野生型，保存了休眠状态的缺陷型 细菌－青霉素，酵母－制霉菌素 菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺陷型孢子却因未发芽而不能滤过 第三十二页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 检出缺陷型 原理：在固体基本培养基和完全培养基上，生长情况完全不同，缺陷型在CM上生长良好，而在MM上则不生长，野生型都能生长。 具体方法：影印法、点种法、夹层法 第三十三页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 第三十四页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 生长谱测定的方法 　　　将缺陷型菌株培养后，收集菌体，制备成细胞悬液，与MM培养基(融化并凉至50℃)混合并倾注平皿。待凝固后，分别在平皿的5-6个区间放上不同的营养组合的混合物或吸饱此组合营养物的滤纸圆片。培养后会在某组合区长出，就可测得所需营养。一个平皿测一个菌。 第三十五页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 　　　以不同组合的营养混合物与融化凉至50℃的MM培养基混合铺成平皿，然后在这些平皿上划线接种各个缺陷型菌株于各相应位置，培养后根据在这些组合长出可推知其营养因子。在5－6个平皿上可测20株菌以上。 第三十六页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 (2)筛选抗反馈调节突变株 筛选结构类似物抗性突变株 结构类似物：结构与代谢产物类似的化合物 特点：有反馈调节作用 无正常生理功能 筛选方法：浓度梯度法（补充） 利用回复突变筛选抗反馈突变菌株 第三十七页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 第三十八页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 诱变育种实例： 赖氨酸高产菌株选育 第三十九页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 天冬氨酸 黄色短杆菌的代谢过程 甲硫氨酸 苏氨酸 赖氨酸 天冬氨酸磷酸 天冬氨酸激酶 天冬氨酸β－半醛 抑制 高丝氨酸 高丝氨酸 脱氢酶(HD) 第四十页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 黄色短杆菌的代谢特点 天冬氨酸激酶（AK），是一个变构酶，并有两个活性中心，分别受Lys（赖氨酸）、Thr（苏氨酸）的协同反馈抑制 协同反馈抑制：该酶有多个活性中心，抑制物可以分别和某一个特定的活性中心结合，但是并不影响该酶的活性，只有当该酶的所有的活性中心都被抑制物结合后，其活性才受到抑制。 第四十一页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 两个分支点的优先合成机制 ： 优先合成高丝氨酸Hos，再优先合成蛋氨酸Met 当Met过量时 阻遏琥珀酰高丝氨酸合成酶，使代谢流向合成Thr的方向进行 当Thr过量时 反馈抑制高丝氨酸脱氢酶，使代谢流向Lys的合成上。 （Met＞Thr＞Lys） 第四十二页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸-β-半醛 高丝氨酸 高丝氨酸磷酸 O-琥珀酸高丝氨酸 二氢吡啶-2,6-二羧酸 赖氨酸 苏氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 第四十三页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 育种途径 切断或减弱代谢支路 切断或减弱合成Met 、Thr的分支途径——选育营养缺陷型突变株 第四十四页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 可选用Hos-，其意义在于： 解除了Hos的优先合成机制，阻断了代谢向Met、Thr的方向进行，节省了原料，可以使Asp-β-半醛这个中间代谢产物全部转入Lys的生物合成上。 第四十五页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 在培养基中限量的供给Met 、Thr（或者Hos），对于AK酶活性的调节有着重要意义。 因为AK酶是一个协同反馈抑制的变构酶，限制了其中某一个抑制物（Thr），则Lys的浓度再高，也不会影响到AK酶的活性，那么，代谢一直向着赖氨酸合成的方向进行，使得产物的合成畅通无阻。 第四十六页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 菌种选育是一门应用科学技术。 理论基础:微生物学、微生物遗传学、生物化学、分子生物学、基因工程等学科。 目的: ？ 第一页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 菌种选育目的 提高产量 产生新的生物活性物质 改变产品质量和组分 简化工艺，缩短周期 抵抗不良环境 适应新的原材料 提供分子遗传研究材料 研究生物合成调控机理 分析生物合成途径 获得带遗传标记的菌株 了解菌种遗传背景 生产 科研 第二页，编辑于星期五：二十三点 十四分。 青霉素生产菌种选育 1928年，Fleming,点青霉2U/mL 1943年，一农妇的发