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氧氟沙星片的含量验证实施方案 一、设计背景 氧氟沙星（分子式C18H20FN2O4），别名氧氟多沙、菲达宁、盖洛仙；氧氟沙星是一种人工合成、广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，为微黄色结晶、无臭、味苦、见光慢慢变色，易溶于水醋酸，难溶于氯仿（三氯甲烷）、水、乙醇、甲醇和丙酮，不溶于乙酸乙酯。 氧氟沙星作为一种广谱抗生素，对革兰阴性菌及阳性菌有较强的抑菌作用，且其具有吸收好、血药浓度高、耐药性低、半衰期长、毒副作用小、能迅速分解到各组织特点，使其成为目前最常用的合成抗菌药之一。因此，为了保障广大群众的用药安全，应加强氧氟沙星的质量控制，其中氧氟沙星含量的测定是质量控制中的一项重要内容。 二、设计依据 氧氟沙星是第三代合成抗菌代表药物之一，氧氟沙星的化学结构中有多个共价键，具有-F、羧基、醚键、碳氧双键、碳碳双键、苯环等结构。目前，国内外检测氧氟沙星的主要方法有：免疫法、分光光度法、荧光法、高效液相色谱法等，这些方法具有其各自的优点，但是却普遍存在定性能力差，检测限高等缺点，很难满足对氧氟沙星准确定性定量的检测要求。 本实施方案在查阅氧氟沙星含量测定方法的基础上，设计液相色谱质谱联用技术（HPLC-MS/MS）测定氧氟沙星片中氧氟沙星的含量。液相色谱质谱联用技术具有分离能力强，选择性好，灵敏度高，可以实现高通量检测等优点，在药物检测中的应用越来越广。液相色谱质谱联用仪以高效液相色谱作为样品分离系统，质谱作为信号检测系统。样品中目标化合物在色谱柱中被分离开，在质谱质量分析器中检测化合物的质量数，从而得到不同的质谱图。液相色谱质谱联用技术将色谱和质谱的优势进行互补，以高效液相色谱优异的分离能力，结合质谱的高选择性、高灵敏度等特点，使其在药物分析等领域得到了广泛应用。 三、设计方案 （一）仪器与试药 1.仪器 液质联用仪：Q-Exactive，Thermo Fisher 十万分之一电子天平：MS205DU，瑞士梅特勒 涡旋混合器：SI-0246，美国SI 数控超声波清洗器：KQ-400DB，昆山市超声仪器有限公司 高速冷冻离心机：5430R，德国艾本德 比色管、容量瓶、移液管、吸耳球 2.试剂 甲醇（质谱纯）：批号：Lot 195897，生产厂家：Fisher Chemical 甲酸：批号：LOT#SHBJ0951，生产厂家：Sigma-Aldrich 3.试药 氧氟沙星标准品：批号：130454-201206，生产厂家：中国食品药品检定研究院 氧氟沙星片：批号：B170202033，生产厂家：四川科伦药业股份有限公司 （二）检测条件 1.液相色谱条件： 流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：甲醇 柱温：30 ℃ 色谱柱：Hypersil GOLD C18，100*2.1mm*1.9μm。 流速：0.3 ml/min 洗脱方式：梯度洗脱 时间，min 0 0.5 4 5 5.1 6 A泵流比，% 90 90 10 10 90 90 2.质谱条件： 离子源 电喷雾离子化源（正离子模式） 鞘气流速 40 arp 辅助气流速 10 arp 吹扫气流速 1 arp 毛细管电压 3.5 kV 离子传输管温度 350 ℃ 气化温度 350 ℃ 扫描模式 基于母离子列表的数据依赖采集（PRM） （三）溶液的制备 1.标准品溶液的制备：精密称取氧氟沙星标准品10.48 mg到10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，得浓度为1.05mg/mL的标准储备溶液。 2.供试品溶液的制备：准确称取氧氟沙星片m（精确至0.001g）g于10 mL比色管中，加50%甲醇溶解，摇匀，超声，过滤，稀释后进样分析。 3.流动相的制备：取0.5 mL甲酸溶液加入500 mL纯水中，摇匀，超声。 （四）方法学考察 1.专属性试验 取氧氟沙星标准品溶液和空白试剂溶液各5μL注入液质联用仪，记录质谱图。 图1 氧氟沙星标准色谱图 图2 氧氟沙星标准质谱图 图3 空白试剂色谱图 2.精密度试验： 配置浓度为100 ng/mL的氧氟沙星标准溶液，连续进样6针，结果见表1： 表1 精密度试验结果表 编号 峰面积 平均值 RSD% 1 2185355 2089273 2.6 2 2097901 3 2081568 4 2077337 5 2071556 6 2021921 结果表明精密度良好。 3.线性关系： 按照表2配制标准曲线，进行测定 表2线性关系 编号 1 2 3 4 5 6 吸取应用液体积（mL） 0.001 0.05 0.1 0.25 0.5 1 定容体积（mL） 10 10 10 10 10 10 氧氟沙星浓度（ng/mL） 1 5 10 25 50 100 氧氟沙星峰面积 43931 304706 637514 2